CIK细胞培养疑问

xiangbalao

最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3，IL-2，IL-1好像没起到作用，: _; d# Q- _0 I+ ]
一直贴壁，吹不下来。而且，加完因子后没有细胞克隆团产生。
1 g/ ^2 X2 c6 h4 _还有一种情况是细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，这会是什么原因？

sunny.yc

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  J! L  k1 l/ Q) N- e3 B# c
& D8 d; |8 s* W2 E+ M# x8 D我觉得应该是因子问题，当然，你要先确定你提取出的贴壁细胞是单个核才行

aochongyu

是不是单个核细胞分离效果不好的结果啊

yingjie

想问下你是这一份细胞出现这种情况还是你做的所有CIK细胞都出现这种情况，如果你别的细胞培养的都很好，再找找问题所在就比较容易了，如果所有细胞都如此，换培养方法吧，绝对培养方式有问题。前面很多朋友都提到了原因所在，多想想。健康人的外周血来源或脐血来源的PBMC诱导扩增还是比较容易的，还有现在很多实验室都用配制好的完全培养基，自己配制的也没问题，就是耗时又耗精力还容易出问题。可以说说你的大概培养过程吗

xiangbalao

回复 CELL007 的帖子  Z! T# Q+ J9 }, i; y4 F

- W- k4 C. u' a- i( G收集的细胞也不少，种植密度也不稀

CELL007

我有师弟遇到和你类似的情况。他就是获得的单个核细胞太少，然后铺的太稀，细胞就一直长不起来。

jiguojie87

回复 xiangbalao 的帖子$ E. w5 K( N$ D) P
! ?1 g: G; P7 q) l, b4 b4 @0 X
从以下几个方面考虑：1、标本来源2、培养液3、因子、抗体4、分离发放5、污染问题。把抗体好好检查检查。

xiangbalao

回复 沙漠狐o0 的帖子- x& G/ {1 L9 M7 ?

, W9 A5 B7 \% b, z# {因子浓度没错

chenguangyu

单个核细胞提取的量是多少、你接种的密度是多少、细胞因子加的量及先后顺序都有可能有影响

沙漠狐o0

请问培养基中为何要加IL-1呢？
8 x! Q% p& v' C培养基中添加因子浓度对了么？CD3、IL-2的浓度有没有弄错？