亲们，我这个Western 的目的条带为什么出现了两条带？

微笑流滢

亲们，我这个Western 的目的条带为什么出现了两条带？左边的样是过表达的，上面的不太像是一条带，大家出现过这种情况吗？刚刚没有上传图片，不好意思

碧螺春的秋天

非特异性，转入蛋白所带标签，翻译后修饰都有可能，不过看上去对照和实验的下侧条带一样，上面的过表达蛋白较大，有可能是过表达载体上有其他东西表达了，建议检查下载体元件

石山巨石

这上面那条 是由于东西多了 上下两条带目测比例大概是 100：1 下面那条带 我到时觉得 和对照 还是有一点细微差异的 多跑跑看看 有没有区别

石山巨石

这上面那条 是由于东西多了 上下两条带目测比例大概是 100：1 下面那条带 我到时觉得 和对照 还是有一点细微差异的 多跑跑看看 有没有区别

zhucexiaji

2条带，你是用的多抗还是单抗呢？抗体特异性会造成多条带，而且看你的图曝光时间过久，而且抗体浓度用的太高了，建议先测一测抗体效价，减少曝光时间，以及摸索下合适的抗体浓度

微笑流滢

回复 moonison 的帖子( O( z6 d/ F. l. a- j5 S3 \- y
, v; r  ~0 W, `% T, a& G" k( T: V
额，我这个没有Tag

moonison

呵呵，条带的距离和分子量虽然有关系但并不是线性的，和修饰什么的都有关系的，加个TAG就很可能跑出来这种情况的，如果你实在不放心可以再加一个不加TAG的过量表达的对照就清楚了。

yueweilei

回复 微笑流滢 的帖子( D  ?- b! `! `; M! r2 {

- s  w. w) t4 ]2 |右边是空白对照的话，那下面的那条带就是non-specific 条带，上面那条带就是目的蛋白条带。

cronos0910

Maybe that are isoform of your protein.

sc-cxw

两条带的离的很近的情况下  通常是蛋白发生了磷酸化或者乙酰化或者氧化之类的修饰，用软件预测一下是否有翻译后修饰位点。