各位高手，请教一个问题我做一个基因在癌细胞中的作用

embryonic12

/ X5 @2 a2 H: Z+ k& O

$ v! t! D: {6 \# x8 b老师让我做一个基因在癌细胞中的作用。我先测了一下，该基因mRNA的表达量在癌细胞系比正常细胞系中只高2倍多一点。那下一步有必要对该基因做敲减么？1 t, |7 M  n' g) }( O8 H, k: b
感谢指点！

ndwzf

不是很懂，发表一点拙见。
8 D4 A3 F3 {  H, i5 o应该值得做，只要你敲减后能观察到细胞发生的变化就有意义。

embryonic12

回复 ndwzf 的帖子0 e; z% v; Q7 l- O2 t

" B/ M( f0 ]0 o4 r; w不好意思，没表达清楚，应该是该基因算是在癌细胞中异常高表达么？

embryonic12

回复 ndwzf 的帖子8 q$ k  J" R0 c, {1 D

  X; [* h0 f) B" |. D8 z刚接触这一块，实在是懂得很少，请指教。谢谢！

moonison

并不是说表达量低就说明在癌细胞里面没有作用的，我觉得你老板的意思是knock down之后让你看有没有什么phenotype，而这种所谓的phenotype其实分很多的，比如最初级的细胞在显微镜下是否有什么变化，再高级一点比如细胞功能是否受到什么影响，复制，分裂是否有问题，再高级一点比如在某一特定条件下，比如加入某种刺激或者抑制剂细胞的正常表现有什么区别。并不是说基因表达量低就没有研究的必要的。

embryonic12

回复 moonison 的帖子7 z9 T( X4 Z" |6 m% ~

( p  L9 T9 @+ x7 T( H6 ~非常感谢！
, }4 F& }0 P& A% {6 e; q" R还得请教一下，我看别人的文献，做敲减时有直接转染siRNA的，也有用载体携带shRNA的，请问怎么选择？

moonison

都可以，一般发文章的时候两个都要做。siRNA转染效率还不错，短期敲除的效果好一些，不过要花钱，属于消耗品，看你们老板的意思，shRNA等于构建个质粒，低成本，并且可以构建stable cell line，方便之后的实验，而且有些基因表型比较难找在做成stable cell line之后可能表型会更明显一些。基本来说，如果实验室没有限制，建议你两手准备，两个都做。顺序来说，先用siRNA转染确定你的那段是可以work的，然后用这段涉及shRNA质粒。

moonison

都可以，一般发文章的时候两个都要做。siRNA转染效率还不错，短期敲除的效果好一些，不过要花钱，属于消耗品，看你们老板的意思，shRNA等于构建个质粒，低成本，并且可以构建stable cell line，方便之后的实验，而且有些基因表型比较难找在做成stable cell line之后可能表型会更明显一些。基本来说，如果实验室没有限制，建议你两手准备，两个都做。顺序来说，先用siRNA转染确定你的那段是可以work的，然后用这段涉及shRNA质粒。

embryonic12

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/ O# L# Z4 \0 w: j' D6 O
! R3 s0 U" _/ S0 _感谢！

milkmoon

是的，敲减之后看癌细胞的相关癌变特征的变化，如果能跟其中哪一个相联系，那么就研究相关通路的变化。