各位高手，请教一个问题我做一个基因在癌细胞中的作用

embryonic12

" H  Z# W3 _, V( A6 ]7 y
. s& y! o6 Q2 V7 I老师让我做一个基因在癌细胞中的作用。我先测了一下，该基因mRNA的表达量在癌细胞系比正常细胞系中只高2倍多一点。那下一步有必要对该基因做敲减么？! d. s+ W0 ?8 `; x# j
感谢指点！

ndwzf

不是很懂，发表一点拙见。4 G. Q6 r3 r7 K* l( a* }% @5 z
应该值得做，只要你敲减后能观察到细胞发生的变化就有意义。

embryonic12

回复 ndwzf 的帖子
# [; J% j/ q" a. `, o4 Z% u/ Z7 I
) g2 Y  S, z% e* v不好意思，没表达清楚，应该是该基因算是在癌细胞中异常高表达么？

embryonic12

回复 ndwzf 的帖子1 Q' W* S( }) I0 d- l$ U: _
% T( r, ]; B  @
刚接触这一块，实在是懂得很少，请指教。谢谢！

moonison

并不是说表达量低就说明在癌细胞里面没有作用的，我觉得你老板的意思是knock down之后让你看有没有什么phenotype，而这种所谓的phenotype其实分很多的，比如最初级的细胞在显微镜下是否有什么变化，再高级一点比如细胞功能是否受到什么影响，复制，分裂是否有问题，再高级一点比如在某一特定条件下，比如加入某种刺激或者抑制剂细胞的正常表现有什么区别。并不是说基因表达量低就没有研究的必要的。

embryonic12

回复 moonison 的帖子8 V' A8 I6 O, l4 b4 H) p
( p5 s( A  e5 }- M+ \5 G' R' E
非常感谢！; P2 ]) i' O# E2 N9 t4 C
还得请教一下，我看别人的文献，做敲减时有直接转染siRNA的，也有用载体携带shRNA的，请问怎么选择？

moonison

都可以，一般发文章的时候两个都要做。siRNA转染效率还不错，短期敲除的效果好一些，不过要花钱，属于消耗品，看你们老板的意思，shRNA等于构建个质粒，低成本，并且可以构建stable cell line，方便之后的实验，而且有些基因表型比较难找在做成stable cell line之后可能表型会更明显一些。基本来说，如果实验室没有限制，建议你两手准备，两个都做。顺序来说，先用siRNA转染确定你的那段是可以work的，然后用这段涉及shRNA质粒。

moonison

都可以，一般发文章的时候两个都要做。siRNA转染效率还不错，短期敲除的效果好一些，不过要花钱，属于消耗品，看你们老板的意思，shRNA等于构建个质粒，低成本，并且可以构建stable cell line，方便之后的实验，而且有些基因表型比较难找在做成stable cell line之后可能表型会更明显一些。基本来说，如果实验室没有限制，建议你两手准备，两个都做。顺序来说，先用siRNA转染确定你的那段是可以work的，然后用这段涉及shRNA质粒。

embryonic12

回复 moonison 的帖子: A1 g5 j+ B: P" v! b

7 a* f: ~0 t3 z1 P4 ~感谢！

milkmoon

是的，敲减之后看癌细胞的相关癌变特征的变化，如果能跟其中哪一个相联系，那么就研究相关通路的变化。