各位高手，请教一个问题我做一个基因在癌细胞中的作用

embryonic12

. I7 N- e' `$ B0 F2 P

% Y4 p' C" [6 s) i8 W老师让我做一个基因在癌细胞中的作用。我先测了一下，该基因mRNA的表达量在癌细胞系比正常细胞系中只高2倍多一点。那下一步有必要对该基因做敲减么？% Y9 {) `$ k5 L" B3 J7 T2 X
感谢指点！

ndwzf

不是很懂，发表一点拙见。
2 @: J7 `- X- I: `8 K0 F3 h. S应该值得做，只要你敲减后能观察到细胞发生的变化就有意义。

embryonic12

回复 ndwzf 的帖子: r6 {1 i  K5 ^7 X7 T( x% E2 g7 M

! o! k* x: ^: q不好意思，没表达清楚，应该是该基因算是在癌细胞中异常高表达么？

embryonic12

回复 ndwzf 的帖子  [. A* }  T3 \5 B+ M/ s
5 @  T: l* o6 A0 V8 ^; `
刚接触这一块，实在是懂得很少，请指教。谢谢！

moonison

并不是说表达量低就说明在癌细胞里面没有作用的，我觉得你老板的意思是knock down之后让你看有没有什么phenotype，而这种所谓的phenotype其实分很多的，比如最初级的细胞在显微镜下是否有什么变化，再高级一点比如细胞功能是否受到什么影响，复制，分裂是否有问题，再高级一点比如在某一特定条件下，比如加入某种刺激或者抑制剂细胞的正常表现有什么区别。并不是说基因表达量低就没有研究的必要的。

embryonic12

回复 moonison 的帖子7 F/ o) G( {0 b% w1 M8 Y6 N) Y. n  H
2 Y; |) k: E* ?' _/ ~  k
非常感谢！2 E4 h, `, P- y# f0 P1 s# x2 m
还得请教一下，我看别人的文献，做敲减时有直接转染siRNA的，也有用载体携带shRNA的，请问怎么选择？

moonison

都可以，一般发文章的时候两个都要做。siRNA转染效率还不错，短期敲除的效果好一些，不过要花钱，属于消耗品，看你们老板的意思，shRNA等于构建个质粒，低成本，并且可以构建stable cell line，方便之后的实验，而且有些基因表型比较难找在做成stable cell line之后可能表型会更明显一些。基本来说，如果实验室没有限制，建议你两手准备，两个都做。顺序来说，先用siRNA转染确定你的那段是可以work的，然后用这段涉及shRNA质粒。

moonison

都可以，一般发文章的时候两个都要做。siRNA转染效率还不错，短期敲除的效果好一些，不过要花钱，属于消耗品，看你们老板的意思，shRNA等于构建个质粒，低成本，并且可以构建stable cell line，方便之后的实验，而且有些基因表型比较难找在做成stable cell line之后可能表型会更明显一些。基本来说，如果实验室没有限制，建议你两手准备，两个都做。顺序来说，先用siRNA转染确定你的那段是可以work的，然后用这段涉及shRNA质粒。

embryonic12

回复 moonison 的帖子. Y. M0 r, `' F& z0 d# _% I3 a/ C
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感谢！

milkmoon

是的，敲减之后看癌细胞的相关癌变特征的变化，如果能跟其中哪一个相联系，那么就研究相关通路的变化。