脐带间充质干细胞增殖慢

xingyuncao

去年我一直用组织贴壁法养人脐带间充质干细胞，培养基是DMEM低糖+10%FBS，细胞都养的挺好的，但是最近用相同的方法，却一直养不好，传代后细胞大量死亡，细胞变得宽大，扁平，增殖很慢，不知问题出在哪，非常着急，急需各位解答，感激不尽！

xuyang0317

细胞死亡多可能是胰酶的原因，你消化时间太长了还是浓度问题？增值慢我觉得是因子的原因，之前我也遇到过增值慢，后来换了因子就好了，其他的PBS和DMED低糖好像关系不大，我建议是查查你们的因子和胰酶！还有孵箱的培养条件设定出问题没？

xingyuncao

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培养箱的CO2浓度可能和之前有0.1%-0.3%的差别，这个影响大么？

xuyang0317

这个不知道你们用的什么设备，CO2的浓度不是可以设定在一个稳定的值吗？为什么会有偏差呢？还有水，孵箱里的水你多久换一次？

xingyuncao

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因为之前培养箱不是我设置的，今年来了以后，我对培养箱进行了一次高温消毒，消毒后重新校准温度和CO2浓度，所以这个可能和去年有稍微一点差别。水半个月换一次，和以前一样

流泪的鱼

各方面原因都有，还有一个不可忽视的因素是：血清，批号是一样的吗？你确定不是假血清吗？你确定不是黑心试剂商捣鬼的吗？我遇到过假试剂，害我不浅。

xingyuncao

回复 xuyang0317 的帖子  D5 Y1 S" s( e! t4 d8 Q

7 X  c; i. s- Q# }我们的培养箱是Thermo的，可设置高温消毒

aochongyu

培养的第几代，有时候代数大了也会影响增殖的。其他的污染，比如说培养瓶、培养基、因子什么的都有可能，还是一样一样分析分析吧5 d. T* t! k& q0 `2 M" o

xuyang0317

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我们也是Thermo的孵箱，这个没污染，我觉得应该是试剂的问题，你个人觉得会是什么原因？毕竟是你在操作，我们只能远程帮你分析，主观的还是看你，co2一点点偏差应该没关系，但是这些还是得严格要求，孵箱建议校准下，FBS的影响我们没有遇到过，统一是进口的，我觉得还是因子和胰酶的原因。: C1 s2 p9 I* j: i
元芳，您怎么看？

xingyuncao

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我和之前一样，没有添加任何因子，胰酶也是和以前一样，找不到原因了。。。