胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。
6 J: n! Y" n  {& m/ T1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？
4 q* ~- t& F2 c% ^; k* h7 Z7 B2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

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5 ~8 [( o& R6 s0 x6 o1 D; e/ g! n2 A9 D  R: G; b
楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

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9 f- o# o7 V$ M3 w9 A$ E: ?/ a) o& E; O! h1 H. N4 ]
哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

% F! [* H0 Z6 w: W4 M

3 [5 X* y/ {4 I* |7 ~; D/ T# E5 Z胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。
- B, A& q% `+ l: D  R0 A4 {7 A
9 Z& H* o: N- ~5 |, ^0 c并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题
! Z) h+ Y; ^9 h; ?. H0 U# v运输过程不要太长 取到标本后 封口运输
5 a' u  ^4 Y4 x2 Y我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时  W: l% h% j$ c0 w
清洗就只用双抗 没有用过酒精- N9 d$ C) Z# C* O$ g+ ]
做了几十次 就一次污染
( o" g! Q  w+ u关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁 4 r( J4 l, Q$ k9 n0 |' R) d) p

单个核细胞

回复 willow0711 的帖子& P  C, j& X1 H9 L$ z) `0 h

5 c8 s4 P3 o* J; Z: {) ^胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。
6 h0 y, u2 n, N! c/ F
, Q( u7 g  a) V: j3 e% u0 p注意几点：5 K/ e' k4 O( d) h5 _- [
1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；
' Z3 d2 H$ W+ q* R, Z! m2 n2.采集液加入抗生素；
3 m9 l$ G( A  X- ^& t3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；
% _% S/ ?* i3 E: _$ W+ A4.建议使用一次性细胞筛网；
3 m4 }$ z* ?* e5.注意无菌操作。

willow0711

回复 piano尤尤 的帖子( s7 ]9 O8 k6 o; A( K; D
9 U% S) e$ Y, P. d  w% u, I, @3 `
哦，谢谢% n8 j# h. a- w0 s4 S8 C" c' ?
每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

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  ]/ p) w% y: m# ?, t恩，谢谢

cantonchn

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0 W8 \' S. d. D/ z
5 @; ]( L( w) s' u9 r$ {那污染的可能性就大了~~- a& Q5 N0 W* h! h6 s* K# j