胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。
4 a. b. b! p7 v" L2 K& m3 I1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？" X5 Y% M( J, h% a6 u1 Z
2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

回复 willow0711 的帖子. X, R, H! f& C+ ]0 G; m3 l6 W

2 |" T4 f& @3 a- V( a/ _" \7 d  e楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

回复 uslzhang 的帖子5 B( w4 O& C# [( f# }
7 R* d' y1 f9 ]2 w4 f- c
哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

5 K9 F: ?4 Y7 M; g& ^/ x2 b8 w: Y- T1 |: Y0 B8 k# y
胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。# x# Z7 k1 G$ u8 B6 }+ n! Y( J
+ w9 I( r4 q" ?% N) ^4 _  c
并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题
; W$ U" D- N0 l! U4 E& _运输过程不要太长 取到标本后 封口运输
, ^( }! C, j# E' F) R我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时
3 B: X0 }5 f9 s- F& C0 W清洗就只用双抗 没有用过酒精
) ^; M: f7 X! T0 D( J7 @( y: @+ B做了几十次 就一次污染" |5 }2 Q6 P# P! a' B' E! f
关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁
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单个核细胞

回复 willow0711 的帖子) e/ l% c& R% c+ F
! ^2 L# _  I' m' U) K7 a
胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。
) P( s- d8 |6 i
- q! x" t6 J! v) c5 N7 N& C; m& M注意几点：
- g/ |: f+ w6 E. Y- l6 I1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；
! O2 E& a6 N. h2.采集液加入抗生素；
$ D7 D3 d  w3 A8 r! ]3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；
) `/ |" y3 m: z  _8 j6 d: H4.建议使用一次性细胞筛网；
3 t( l5 V7 C# M5.注意无菌操作。

willow0711

回复 piano尤尤 的帖子+ [2 u+ B  R' P2 R  C, i$ j7 U$ |1 _
/ N3 p+ Q6 k& a+ T7 Z5 \$ ^
哦，谢谢
' N7 K; u% q# B! t每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

回复 单个核细胞 的帖子
+ A* m3 c1 A- ]$ X5 n+ {7 d# s% U/ R/ l1 M0 x6 P! s
恩，谢谢

cantonchn

回复 willow0711 的帖子6 p9 I6 q. K7 \9 Z3 t/ W

/ {3 Q( m- J6 H& P* p" q那污染的可能性就大了~~
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