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心肌干细胞传代时消化不下来 [复制链接]

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楼主
发表于 2013-10-20 17:32 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
      我刚刚开始做心肌干细胞的培养工作,对原代培养14天的心肌干细胞进行传代操作,弃去培养基,PBS轻柔的洗2次,再使用碧云天胰酶,浓度0.125%2ml消化1min,之后加入DMEM4ml终止消化,涡旋振荡器100次/min,震荡了7min(文献为2min),但是消化下来的心肌干细胞还是很少,就不敢再震荡,怕贴壁组织块被震荡下来,不知道大家有没有遇到过此类问题。所用为wistar大鼠心脏组织块。谢谢大家了
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沙发
发表于 2013-10-21 10:34 |只看该作者
各位前辈们,有知道的可以回复一下吗?真心需要帮助,我自己分析是不是和所用酶的温度有关,一般都是存放在4℃的,预热一下会不会好一些,还有就是可以尝试一下用移液管吹打。
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藤椅
发表于 2013-10-21 10:35 |只看该作者

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板凳
发表于 2013-10-22 20:09 |只看该作者
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你可以试一下TrypLE select细胞消化液,我们用过,效果不错
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报纸
发表于 2013-10-23 09:46 |只看该作者
回复 wujian 的帖子: u& r5 P9 O$ q/ z
6 q+ O! a7 y5 O8 V. y9 @% }
谢谢您的回复,我尝试着用一下,但是我的干细胞是长在成纤维细胞层之上的,这样会不会造成混杂,还有就是你们用的时候都是什么浓度与用量?不胜感激
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地板
发表于 2013-10-23 11:07 |只看该作者
我觉得你的组织块培养,本身方法就不是太好,因为组织块培养细胞太杂,我也做过,后来就直接消化培养了
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发表于 2013-10-23 11:26 |只看该作者
胰酶要放到室温再用的,4°C拿出来直接用效果肯定不好。
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发表于 2013-10-23 14:53 |只看该作者
回复 rosejiajia999 的帖子
: [& |. H; }& N5 e# _& @) a3 Z7 E/ K: @! d% k( E2 o" z- z
我查阅了很多文献,改良组织块消化法被证明是最有效的方法呀,你们用的什么方法呢
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发表于 2013-10-23 14:55 |只看该作者
回复 tianangelt 的帖子, {$ a; y; K$ X: i7 i, L

9 \  |; w% P  F; ?- u( g" a1 s是呀,实验前开紫外灭菌的时候胰酶被拿到室温了,两天前我又做了一次传代,消化的时候用酒精灯火焰烘烤了,这次是消化下来了,但是消化下来的大部分是成纤维细胞滋养层,干细胞被消化下来的相对较少,按照文献中的方法应该是干细胞先被消化下来的,嗨
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发表于 2013-10-23 15:04 |只看该作者
组织块法细胞混杂是难以避免的啊,一般都是先增殖后用磁珠筛选来确保细胞的纯度。其他问题请参考说明书+ b1 t4 M/ a$ k8 _+ H7 q0 G
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