心肌干细胞传代时消化不下来

杨张懿轩

      我刚刚开始做心肌干细胞的培养工作，对原代培养14天的心肌干细胞进行传代操作，弃去培养基，PBS轻柔的洗2次，再使用碧云天胰酶，浓度0.125%2ml消化1min，之后加入DMEM4ml终止消化，涡旋振荡器100次/min，震荡了7min（文献为2min），但是消化下来的心肌干细胞还是很少，就不敢再震荡，怕贴壁组织块被震荡下来，不知道大家有没有遇到过此类问题。所用为wistar大鼠心脏组织块。谢谢大家了

杨张懿轩

各位前辈们，有知道的可以回复一下吗？真心需要帮助，我自己分析是不是和所用酶的温度有关，一般都是存放在4℃的，预热一下会不会好一些，还有就是可以尝试一下用移液管吹打。

杨张懿轩

wujian

你可以试一下TrypLE select细胞消化液，我们用过，效果不错

杨张懿轩

回复 wujian 的帖子; e! }. w+ I5 H' U9 m

9 n- `% r* L' b谢谢您的回复，我尝试着用一下，但是我的干细胞是长在成纤维细胞层之上的，这样会不会造成混杂，还有就是你们用的时候都是什么浓度与用量？不胜感激

rosejiajia999

我觉得你的组织块培养，本身方法就不是太好，因为组织块培养细胞太杂，我也做过，后来就直接消化培养了

tianangelt

胰酶要放到室温再用的，4°C拿出来直接用效果肯定不好。

杨张懿轩

回复 rosejiajia999 的帖子$ Q: B$ X, o: t9 f+ W( Z

7 y( c( n  e5 x我查阅了很多文献，改良组织块消化法被证明是最有效的方法呀，你们用的什么方法呢

杨张懿轩

回复 tianangelt 的帖子1 ?- P' W2 L" U  @* x
6 n: D1 H" T! S
是呀，实验前开紫外灭菌的时候胰酶被拿到室温了，两天前我又做了一次传代，消化的时候用酒精灯火焰烘烤了，这次是消化下来了，但是消化下来的大部分是成纤维细胞滋养层，干细胞被消化下来的相对较少，按照文献中的方法应该是干细胞先被消化下来的，嗨

wujian

组织块法细胞混杂是难以避免的啊，一般都是先增殖后用磁珠筛选来确保细胞的纯度。其他问题请参考说明书2 L9 |, P, V( d$ v" `) B4 Z