脐血单个核细胞分离出现很多白色沉淀的问题

tianangelt

用Ficoll法分离脐血单个核细胞，吸出白膜层离心后，离心管底有很大一块白色沉淀（明显细胞没有那么多，大概是平时细胞沉淀的3倍），洗涤接种到培养瓶中后，镜下看到底部有一层白色东西，细胞点缀在上面；高倍镜下观察，底部的白色东西也是小圆透亮，以前没有出现过这种情况，请问大家遇到过这种情况吗？是什么原因造成的呢？

tianangelt

回复 wind789 的帖子2 J. @2 @* u& L1 f' C5 N9 H

& I, u. L9 H% r/ Q$ mFicoll一直都在用，之前没有出现过这个问题，也怀疑过是不是血小板，但洗涤的过程中怎么一点都没有洗掉呢，困惑……

tianangelt

回复 lyj-0017 的帖子% X- ]( }3 s& p9 h# Q9 g6 j9 ^7 |
& |, o  \; P6 C! i8 O1 U1 P1 j# }
有拍的照片，但不知如何上传

tianangelt

2013-10-23 11:10 上传

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附照片一张，请大家指教。

tianangelt

回复 mmssyyee 的帖子
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8 u7 _  T& Q. j/ w7 zFicoll什么的都是在保质期内，而且后来又用相同的Ficoll操作过，没有出现相同的现象。但是从操作上面也没有发现问题，实验条件也是一样的，不知道是不是血的问题。

tianangelt

回复 lyj-0017 的帖子/ ?1 Y  d" M' G* ~
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是的，转速都是一样的，吸取白膜层时为了避免丢失，在白膜层的上下液面都会多吸一点，和之前的操作也是一样的。如果是血小板的话，细胞培养的过程中会慢慢消失吗？

tianangelt

回复 lyj-0017 的帖子
5 E6 O; o, I3 _6 P+ ]7 d
& r9 V1 w) x& p" M: E+ d平时分离偶尔也会有一点杂质，但那次分离超级多，后来细胞转移到另外一个瓶，培养了一段时间，没有加因子，只加了点血浆，细胞生长状态挺好的。

tianangelt

回复 gzeb 的帖子
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8 g# i2 d# C) E$ `9 K' L# v最近Ficoll离心完后的白膜层，和上层液面的分界很明显，但和下层没有明显的一个界面分层，偶尔有分界比较明显的。这个是操作的原因吗？每次的转速都是一样的。

tianangelt

回复 gzeb 的帖子
: b0 M7 @- g0 `- r: X6 m3 w8 T; J- ^" M' H; R# R2 N
2500rpm，20min

tianangelt

回复 YUENANYUE 的帖子3 Q& A4 q5 L4 ]  Q0 [

; F0 B7 F- P% @这种情况是偶尔出现，发现培养一段时间以后就会慢慢消失，如何从源头上控制，还没有找到好的方法