关于细胞复苏后贴壁问题

mio

我之前也常常遇到这样的情况，复苏后细胞不行主要还是冻存有问题。我在实验中总结出来的，我的是间充质干细胞，希望对你有帮助。' c  M+ \, [5 B8 M6 }
细胞冻存的细胞生长状态：
9 Z1 ?; R* S' Z) e* g要长势比较好的，不然复苏形态也不好，容易死亡。0 Q6 p2 k$ n4 H+ h
冻存的细胞数量：/ j( S8 }" ]# }/ C1 F% W& W
我觉得一个1ml 一个百万比较好，复苏用T25的瓶，长满比较快，可较快进入实验，冻存细胞数量太多了，密度大，复苏后漂浮的很多。
/ L5 o2 n# u8 O8 c7 T/ c冻存液：
: D' l) H" T1 @( T. p% |纯血清+DMSO，有时候看师姐们为节省血清，降低血清的浓度，死很多估计也很正常。呵呵: K( S* y0 g- J' \0 F
冻存的梯度降温：
/ `' `8 [' R7 `) i4 m) S一定要做到位，细胞适应的过程，4°2-3小时，-20°  过夜，-80°可能保存好几天呢，如果很快就要用，就不需要转到液氮， 但是长时间不用的话，最好还是转至液氮。+ i. v5 V7 S8 a# m/ B
复苏：
  Z; }1 x& n# V& ]2 c快速解冻，跟着指南走没有错。               
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uslzhang

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冻存后复苏本身就是一个重要的工艺环节，需要通过稳定性研究来摸索出适合该细胞的冻存条件，通常有三个因素需要考虑：1.冻存液成分是否适合，2.降温过程，3.冻存密度。