关于细胞复苏后贴壁问题

shuimochunlan

在我们冻存的细胞中有很大比例在复苏后不能正常贴壁或者贴壁率很低，鉴于这种情况，请问要如何改善或者避免上述情况的发生？

zsc78

如果在细胞解冻过程没有，检查一下细胞冻存过程是否规范合理，细胞可能在冻存过程已大部分死亡，你再改进复苏培养措施也没有用。如果都没有问题，可考虑被覆胶原、纤维蛋白原等基质试一试。

mio

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用梯度降温冻存盒当然更方便

SKC-SFC

这个情况主要是以下3个方面造成：
/ U8 \8 w+ p6 ]/ {; _  1.冻存前细胞状态就不好，细胞比较老，冻存复苏后再继续传代，贴壁效果显然不好。至于细胞冻存量不足矣影响贴壁（一般5.0X06没有问题）1 P4 C/ u" x8 h' s' z0 D) P
  2.细胞冻存液不适合细胞冻存，冻存液成分和加入成分比例很关键
8 R; O4 C2 Y# r7 Z  \8 X4 J. q  3.复苏的操作手法和培养基（遵循慢冻速溶的原则，培养基提前预热并选择合适）

SKC-SFC

这个情况主要是以下3个方面造成：
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  2.细胞冻存液不适合细胞冻存，冻存液成分和加入成分比例很关键6 v+ ], s' i  p
  3.复苏的操作手法和培养基（遵循慢冻速溶的原则，培养基提前预热并选择合适）

Amanda121201

恩 多数我们在复苏的时候要离心 去除DMSO的残留 所以 可以将冻存管放置37°化开后 直接放进已加入5ml左右的完全培养基中 然后低速（大约800rpm左右吧）离心 去上清后 再加入培养基重悬 一定要温和 因为有些移液枪的力度比较大 所以要注意 缓慢抽打

shuimochunlan

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( B) h5 f8 ^( g& I8 U5 S/ J$ D
你说的是复苏离心后的细胞重悬吗？但是这个环节怎么改进为‘非常温柔’ 呢？

shuimochunlan

回复 mio 的帖子- O! G6 L/ }1 z3 b5 Q1 z+ ]

! ]7 S3 [) o; n9 N: I7 S6 G6 T$ q如果用梯度降温冻存盒的话是不是降温过程就不会这么麻烦了？能不能直接转移至-80℃冰箱？

shuimochunlan

回复 uslzhang 的帖子
+ s& w! Z0 D9 J3 F$ @) F( E# i0 s, C  Z0 @* t0 m, c; n9 u# E- T
在我们的操作中您说的三个环节具体来说是这样的；1   FBS 为50%，2 直接放在4℃梯度降温盒内然后转移到-80℃冰箱，两三天后转移至液氮，3  密度最好是5百万/ml,看看我们要从哪个环节上努力？

Amanda121201

我是培养MSC的，以前也遇到过这样的问题，除了楼上几位说的那种冻存期间的问题 再就是要非常gentle的去吹打复苏 减少不必要的物理刺激，同样可以达到较好的复苏目的