丝裂霉素处理细胞

jiaocuihua123

我用丝裂霉素处理一种小鼠结缔组织细胞，发现细胞还在代谢增殖，已经是8微克/毫升，处理2h。再延长时间细胞就会死，时间短的话细胞还会长，不知道该怎么处理了，请问一下有没有相关的文献介绍丝裂霉素的使用方法，想看看能不能找到解决办法，是不是改改浓度还是改变时间还是改变培养液呢？换上干细胞培养液后，细胞开始死，难道是培养液的问题吗？非常感谢！

淡定的摩羯

1.你的干细胞培养液有没有培养过其他的细胞  如有 情况怎样  检查一下β-me浓度是否正确，β-me浓度高的话容易造成细胞死亡。6 S  b* r+ {. z4 t3 ?
2.检查一下你的丝裂霉素浓度是否正确。我配置丝裂霉素时，用DMSO溶解。常温下，PBS溶解不够彻底，导致浓度有误。不知道你用啥试剂溶解的？

南宫燚岚

难道丝裂霉素C灭活不是最低10μg/ml的浓度么？而且最短2小时。灭活MEF和增殖旺盛的细胞基本都是这样的protocol

jiaocuihua123

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/ |8 F& O% |& q非常感谢你的回复，我用的是培养液溶的，我怀疑是那个细胞的问题，我再摸一下条件吧，谢谢啦！

jojo1988509

培养液和PBS都可以拿来溶MMC啊，我用的10ug/ml，处理3-3.5h，处理完后用PBS多洗几遍尽量洗干净，我用着是没有问题的。不过我还看过一些protocol是照什么射线照几个小时灭活MEF，说这些可减少后期残留MMC对细胞的伤害。

jianglei_sd

细胞辐照仪，或者血液辐照仪。γ射线或X射线辐照。不过这种设备太贵，血液辐照仪一般是血站用的。

jianglei_sd

细胞辐照仪，或者血液辐照仪。γ射线或X射线辐照。不过这种设备太贵，血液辐照仪一般是血站用的。

chichao0000

不知您说的是不是去除成纤维细胞，我们去除成纤维细胞用的是阿糖胞苷（20 μM cytosine β-D-arabinofuranoside,sigma) ,加入培养基作用48h后改为普通培养基培养，效果很好。