消化MSCs时候用胰蛋白酶+EDTA,事后必须离心吗？

wanglimaomao

我养过很多细胞，娇贵的干细胞，原代细胞，经得起折腾的一些肿瘤细胞，个人做法，控制好消化的火候，一般都是在细胞变圆，吸走胰酶，继续用细胞表面残留的消化液继续消化，到细胞可以以吹下来的情况下，加入培养液终止，轻轻吹下细胞，传代，根据细胞贴壁时间长短不同，一般内皮30分钟就可以了，如果底面铺胶，更容易贴壁，其他细胞可以观察一下规律，贴壁后换新鲜培养液，继续培养，先贴壁的细胞一般都是活力较好的，不好的细胞也筛选出去了。我个人不太喜欢离心，因为离心对细胞损伤其实也不小，尤其离心后重悬过程，如果细胞容易成团，就需要多次吹打，这对细胞损伤更大。再说，即使离心了，最后残留的胰酶，和我上述做法的残留的也差不多，而且离心的速度，时间的长短都对细胞有影响。减少离心，也减少了实验步骤，缩短时间，一般我传代5-10分钟，而其他人传代都需要30分钟左右。培养的细胞有时候还不如我这样的做法。所以，楼主可以借鉴一下，试试我的方法。

wanglimaomao

补充一点，我养过小鼠的原代MSC，基本也是用这种方法。很少离心，即使复苏细胞也是贴壁后换液，减少离心步骤。培养的细胞也很好。