肿瘤细胞裂解液制作

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手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；. V+ q1 c: o( S# x+ C' J% F
无菌生理盐水洗3次；  n2 @' I6 O4 I0 y7 o
用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；
9 w2 W0 S; m5 x; N( E" H200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；1 g/ F3 f9 J* S0 Y
用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；
- \9 A+ N0 I! W6 v/ ^将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；- r! G3 |5 S( c/ v, V
注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。
- W: \" M# g' I  X/ b9 Z( X将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；-80oC保存备用。+ [/ D, x6 X% K* T" f2 D
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以上是查到的方法，请各位专家帮忙查看是否可行，尤其是在零下80度和37度反复冻融取代液氮反复冻融可以吗？另外还需要注意什么？最后检测蛋白含量是检测什么蛋白？