肿瘤细胞裂解液制作

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手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；
3 S- a& K# t/ p2 h: F6 [无菌生理盐水洗3次；
4 w' F; @  Z2 X, Y9 e) g用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；
" s, r7 G9 d- y1 e5 i$ b& Z# [200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；) A* ~1 J  X) O- o7 q2 S+ b
用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；
" E4 N$ m& _6 j' ?$ A& S& u将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；
4 _' Q( a0 q5 X3 k5 h注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。6 c" n5 n, Z* ~8 ^
将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；-80oC保存备用。
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以上是查到的方法，请各位专家帮忙查看是否可行，尤其是在零下80度和37度反复冻融取代液氮反复冻融可以吗？另外还需要注意什么？最后检测蛋白含量是检测什么蛋白？