肿瘤细胞裂解液制作

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手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；" I# L+ ]/ A* [! n6 q7 p3 A
无菌生理盐水洗3次；" {# _& P/ V' Q3 F  u2 T+ n2 Z" F0 Q- {
用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；
( {9 u) m$ R$ F5 X2 K2 }) K200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；" L. _, O4 B! V% z
用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；1 a& C5 u: t1 }' H6 T3 G- g$ b
将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；
5 l0 Q) Z7 I3 A0 g2 c' A注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。! |# ^! [) e* f, Z. n( l$ h
将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；-80oC保存备用。; c$ i- E1 @' J4 N4 f
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以上是查到的方法，请各位专家帮忙查看是否可行，尤其是在零下80度和37度反复冻融取代液氮反复冻融可以吗？另外还需要注意什么？最后检测蛋白含量是检测什么蛋白？