胰蛋白酶抑制剂

田甜

培养细胞，不想引入血清，传代时胰酶消化后怎么终止其作用呢？
8 F( K+ W$ W7 |9 U1 O8 ~我想购买大豆胰蛋白酶抑制剂，不知道作用效果，请教一下经验人士，大豆胰蛋白酶抑制剂是否真的有用，如果胰蛋白酶含EDTA，它的作用效果是不是会减弱呢？

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由谁来帮忙解答一下吗？谢谢

cyberpig

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我的做法是先把作用完的trypsin吸走，然後用無血清培養基重懸，離心一次吸走培養基，最後加新的無血清培養基。. u% V$ V  o# Q  U+ N$ s* y
大豆胰蛋白酶抑制剂沒用過，不過加一些新東西去細胞我是不太放心的。
+ m9 C: W! a9 a# e% j$ v7 C5 ]胰蛋白酶含EDTA是加強效果，因為edta會chelate鈣鎂離子，減少它們對胰酶的抑制（？）。而且有些細胞間的連結是需鈣離子的，所以edta也會幫助放離細胞。

aochongyu

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- m8 `& R0 G0 I& ]6 v$ t; I: h* p7 R8 `/ x1 _, `. Z8 O, ^
请教一下，直接加入无血清培养基，中和效果怎么样？会立刻停止消化吗？谢谢

cyberpig

無血清培養基是無法中和胰蛋白酶的，所以不會停止消法。不過我的方法是基於對胰蛋白酶的dilution，洗兩次後基本上就沒有胰蛋白酶殘留了。

neng172

EDTA 和胰蛋白酶共同作用消化效果更好，但是EDTA 终止后不易清洗残留。

18605313076

可以先加含血清的培养基终止消化，然后离心去除一下不就行了，再加入无血清培养基培养。

a52602589

等比例加入无血清培养基可终止消化作用

元芳

加白蛋白。
7 g9 N' |# L0 }7 d  b# c或者无血清培养基含蛋白，也行。

swtarron

我们是直接用前面培养瓶中的培养液来终止效果还不错。