CIK细胞培养，出现聚团贴壁！添加小牛血清出现絮状物体。

大海之家

各位朋友们好，小弟近来研究CIK细胞，用的是X-VIVO培养，接种了1-2*106浓度接种，出现大量的细胞克隆贴壁，生长了17天也没散下来，在前期生长较慢，补液间隔一般都在4天，到了15天细胞才长满了瓶底，不过也有大量的克隆集落贴在瓶底上长，一直没散，不知大家有没有遇到此类情况，在第6天添加1%的小牛血清，出现了絮状物，难道血清还有纤维蛋白？希望大家踊跃讨论！

lyj-0017

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首先，应该确定的是，细胞装瓶之前是否已经在培养瓶中进行了贴壁处理？+ `) t7 T3 d0 x! R: i, f
其次，一开始没有加血清，而是在第六天加血清才出现絮状物，不排除是血清中的纤维蛋白粘连细胞，也不能排除是死细胞聚集造成的，建议做个对照试验进行观察。

luyue6453

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1 }5 h- h4 U( N2 o1 y0 e% L
) S( M1 z/ B) q  H( i& E用这个培养液不需要加血清的，一般贴壁是有的，只要不死没关系，一晃还是可以下来的。

大海之家

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% ~5 |( G. q' R/ p! N$ V8 z这次是分了两个浓度培养，一个是1*106，另一个是2*106，低浓度的贴壁的细胞团一直都没散下来，高浓度接种的到了15天慢慢的散下来，细胞增殖加快，细胞密度还行，长得比较圆亮，培养基也黄了许多，低浓度的细胞也有些增长，悬浮的细胞也比较圆亮，就是原来贴壁的团一直都没散，可能是在接种和前期没有添加自体血浆，细胞长得很慢，在15天左右才慢慢长起来，加了两次牛血清，第二天都出现絮状物，应该不是纤维蛋白的问题吧，牛血清是不含有纤维蛋白原，也咨询了技术支持，得到的结论是无血清培养基和牛血清不匹配，但不知道具体是那种原因/ ^0 j) g+ A4 C9 y$ D2 z

大海之家

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- O( V7 E" f- F) `2 n3 Y' r不加血清或者血浆，那细胞是长得很慢的

luyue6453

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% \/ |5 l/ W: R7 l我们是培养前240ml加5%的自体血清，后面不加一样很快啊，一般15天就3000ml了，你如果加小牛血清出现絮状，你首先考虑加的血清量是不太大，第二这批血清有问题。一般加血浆超过1.5%就出现絮状了，以前加自体血浆经常这样很烦，后来就改了。

lyj-0017

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! j, G% C; t5 c) K- l7 ?. e5 e% S4 g# g6 \1 R6 T" e5 _$ y8 ?1 L7 M
所以细胞密度很重要，密度太低了细胞不容易长起来。如果按照技术支持的说法，无血清培养基与牛血清不匹配？估计不会是这个原因吧，可能是你加的血清浓度太高吧。我们以前加过人血白蛋白，对比了一下不加白蛋白的，最后培养的结果也没有发现什么大的差别。

大海之家

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3 o' P; u! m# Y3 ~$ u" o' ~% M" `/ F
我添加的是1%小牛血清，在第6天第一次添加，第二天就有析出，之后又添加了一次，又析出了。你加的是自体血清？是不是经过灭活之后获得的？你讲的加1.5%血浆是不是指没有除去纤维蛋白的还是已经除去了纤维蛋白的？9 a. c7 \  c" a% u. V' _% e# ]

大海之家

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3 }! _9 i  d9 v  B) q. G是的，不过细胞接种密度合不合适还要看培养方法，像我的这种方法还是2*106每ml比较合适

momoenn

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' {; s: s. L' w4 U你好，我最近也在培养CIK细胞，想问一下你这个细胞接种量是多少呢？我们之前有两份接种量比较少的都增殖很慢