人脐带植块培养清洗换液的问题

单个核细胞

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1.不需要特意洗涤，洗涤后水分较大，反而不利于组织块贴壁；9 x- v) e5 Q# q: o( T( Z
2.细胞能不能爬出来，个人认为跟你有没有洗涤没有多少关系；* G. o( [6 \3 L% {. u7 Y  ~
3.组织块贴壁3-5小时后，可直接加入完全培养液，放置9-10天后观察，可见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。! p. D! p& a& n

- w# W! E7 ~7 j% p  e附图如下（点击图片可放大）：
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单个核细胞

回复 luyue6453 的帖子
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% A. d0 q7 A; f' c( z5 s7 ^' L- m从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！" J8 e0 Z1 @  H/ ~
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完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。

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回复 zhoufan025 的帖子8 I% |  J/ K7 J$ D# q
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原代培养的时候可以不着急去组织块，到首次传代时才去除，接种细胞至新的培养皿。若是不去除，组织块有大有小，移液管不能顺利吸取。你可以把去除的组织连同培养液加入到一个新培养瓶，让它继续长细胞。只要细胞长出来了，什么时候去除组织块不是大问题。

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回复 shunanqi 的帖子
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组织块贴壁培养中，可以不用换液，等到组织周围长出适量细胞来，你再换一次，这时候可以去掉脱落的组织块。然后过3天左右（根据细胞生长情况），就可以传代了。