AKP活性检测

huangcong1988

在做AKP活性检测，但是不知道裂解细胞用什么，有的说裂解细胞用超声破碎，有的用TritonX-100裂解的，有的结合用的，想知道大家都用什么裂解细胞收集上清
; R* p" ]' U: s* N/ M$ ]0 W' n我想用1% TritonX-100裂解，在37度 1h，不知道这样能裂解完全么？谢谢大家了

huangcong1988

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! @; |/ f0 |6 [% v* r0 |/ s# e: P+ m# W
我买了一个碧云天的试剂盒，上面只是写裂解完的细胞，离心，上清用来检测

huangcong1988

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6 e: f3 Q6 t% H2 G& o/ \
- l5 A7 N$ P% _5 @0 A% H想知道你们用的什么试剂盒，我用的碧云天的，试剂盒里面没写用什么裂解细胞

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子* |" z, M# N! e  M0 Y

2 c  O+ o9 g, E6 K9 S你们用的什么试剂盒？我买了一个染色的试剂盒，还有一个定量检测AKP活性的试剂盒，都是碧云天的，染色试剂盒挺好用的，很快出结果，但是定量检测的试剂盒里面没写用什么裂解，只是说拿上清来检测，所以我想问问大家用什么来裂解细胞，收集上清

huangcong1988

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" \, y) p) @# `
% z8 B! ?- O/ `% E' p  I提完蛋白以后再按说明定量AKP吗？我看文献中都是用的triton啊，我是怕用其他裂解液会影响AKP活性，导致定量不准确

huangcong1988

回复 wf78365421 的帖子3 Z1 B0 w3 r  j# S3 H0 z) ]! z
- e' P' o* a7 p$ v& A0 J& I$ H
怎么方法都不一样呢？( N" i  }) N- h/ _/ c
所有人的方法基本都不一样
" e$ d9 p" t! ^- `8 P" L7 [我在想，哪种是试过的，比较靠谱的？

huangcong1988

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您用的这种方法吗？他们有的讲说，蛋白容易变性，温度高了的话，所以我在想，是不是得在低温情况下，1 ?2 k9 j  F4 X: `2 z: ~
用1% TritonX-100结合超声裂解？