AKP活性检测

huangcong1988

在做AKP活性检测，但是不知道裂解细胞用什么，有的说裂解细胞用超声破碎，有的用TritonX-100裂解的，有的结合用的，想知道大家都用什么裂解细胞收集上清' Y, b- I2 H& S+ |6 W: H
我想用1% TritonX-100裂解，在37度 1h，不知道这样能裂解完全么？谢谢大家了

sysuhoo

回复 huangcong1988 的帖子7 Q. o* ~* t* g6 Z2 Q

4 _5 {! j: e, S( z3 F4 ~* j1 r# q只用triton效果不是很稳定，最好还是按照常规提蛋白的步骤，譬如RIPA裂解。

sunbird

之前做过一次，用的是超声破碎，可能是超声过程温度过高导致变性了，测得值比预期的低了一截。
8 N: S! _3 p7 p/ Q  k4 O% ZTritonX-100裂解方法没有侧过AKP，之前做PullDown的时候采用8℃裂解3小时，低温防止蛋白降解。
1 K* y1 d. I4 u; ?# T' ?" q  Z; ~没有正面回答你的问题，希望对你有帮助。

sysuhoo

akp又叫alp，测活性前，你最好先做个染色，定性看是否有明确的改变，染色有现成的试剂盒，不贵。测活性其实就是分离蛋白后，定量。所以低温超声结合triton裂解是比较好的方法。不建议37度1h

embryonic12

在冰上，1% TritonX-100裂解0.5 h，冰上超声，10 s X 6次，间隔1 min

zhangshich

有现成的试剂盒，只是AKP在标本处理过程中容易失去活性。

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子  a' I0 L! ]4 W$ p8 A
  g, c) o6 T' s2 \+ S% a+ E" A7 d
我买了一个碧云天的试剂盒，上面只是写裂解完的细胞，离心，上清用来检测

huangcong1988

回复 zhangshich 的帖子
- `) t4 @  k( o3 i3 m( F# C9 a6 o5 o4 S# I- M1 P
想知道你们用的什么试剂盒，我用的碧云天的，试剂盒里面没写用什么裂解细胞

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子  {( V3 I  }% `% J. k  g

/ O: {) G; S6 |0 x你们用的什么试剂盒？我买了一个染色的试剂盒，还有一个定量检测AKP活性的试剂盒，都是碧云天的，染色试剂盒挺好用的，很快出结果，但是定量检测的试剂盒里面没写用什么裂解，只是说拿上清来检测，所以我想问问大家用什么来裂解细胞，收集上清

sunbird

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/ x' ?. m% P! d0 K6 K我之前用的好像是南京建成的。