AKP活性检测

huangcong1988

在做AKP活性检测，但是不知道裂解细胞用什么，有的说裂解细胞用超声破碎，有的用TritonX-100裂解的，有的结合用的，想知道大家都用什么裂解细胞收集上清3 t% T& f# A% ?$ l% `
我想用1% TritonX-100裂解，在37度 1h，不知道这样能裂解完全么？谢谢大家了

huangcong1988

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! W8 [, o6 J* p! m0 r6 H( w2 M
, |7 R7 f3 [: s8 ]6 _5 P您用的这种方法吗？他们有的讲说，蛋白容易变性，温度高了的话，所以我在想，是不是得在低温情况下，$ i- a- e" u  [# K
用1% TritonX-100结合超声裂解？

huangcong1988

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& m; ]7 c& k! [, k3 G, f3 P! k
# g! h  e& j2 [4 j! J5 i怎么方法都不一样呢？
- ^/ T! g! U. j所有人的方法基本都不一样5 S9 Y, f7 s  S0 o* q
我在想，哪种是试过的，比较靠谱的？

wf78365421

1% TritonX-100裂解，在37度 1h可以

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子
% e+ a& b% Y' \' O: ]2 H6 w0 p& N/ W0 F
提完蛋白以后再按说明定量AKP吗？我看文献中都是用的triton啊，我是怕用其他裂解液会影响AKP活性，导致定量不准确

sunbird

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* |( u0 l- }$ G3 p4 o$ l4 f8 \
我之前用的好像是南京建成的。

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子& c% Z  @7 t- ^! @3 k

0 W9 G1 J  p( z( _: W! _* L! q+ i: X你们用的什么试剂盒？我买了一个染色的试剂盒，还有一个定量检测AKP活性的试剂盒，都是碧云天的，染色试剂盒挺好用的，很快出结果，但是定量检测的试剂盒里面没写用什么裂解，只是说拿上清来检测，所以我想问问大家用什么来裂解细胞，收集上清

huangcong1988

回复 zhangshich 的帖子" c' @0 K* `3 S3 @1 p6 X; e8 p- c

) _" c$ h" V' r想知道你们用的什么试剂盒，我用的碧云天的，试剂盒里面没写用什么裂解细胞

huangcong1988

回复 sysuhoo 的帖子- C7 p9 _% {/ @: g

: }# V' }+ \  U2 x9 f我买了一个碧云天的试剂盒，上面只是写裂解完的细胞，离心，上清用来检测

zhangshich

有现成的试剂盒，只是AKP在标本处理过程中容易失去活性。