求可行的磷酸钙转染方法

听不到

老师一直在摸索磷酸钙转染方法，特别麻烦，很浪费时间，但是结果始终没有阳性的，实验也迟迟不能推进，但是看网上各位同学提起磷酸钙转染都很容易的样子，求具体操作方法

weijunning

磷酸钙法转染确实不好把握，需要的技巧性比较高，并且转染效率也不高；建议使用PEI进行转染，易操作转染效率高，并且成本也不会很高。

不倒翁

同意楼上 简单 成本低 可重复性好

hwlightning

我以前一直用磷酸钙转染293细胞，转染效率一般80%左右。转染试剂的具体配方因好久没做那行，忘记了。我到时候找找，有的话就发给你。

julia20

我把磷酸钙转染的配方放到我的相册里了, 你能看见吗?

听不到

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7 o0 j8 A' J$ h
' J, S4 ~/ v4 R打不开啊，没有权限...

听不到

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9 o! ^5 s, V7 N. ]9 F
: \! M! I( s0 v, \4 u0 a  N好的，谢谢啊~

听不到

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0 X1 c, h- O' d! G* B9 u( U! Y! B8 M5 |
我在网上搜了一下PEI转染法，你看这个方法合适吗？
! |6 f/ M) h7 Z0 e2 w: b0 H1细胞贴壁后可进行转染，转染前换为无血清培养基。" }+ Z* N4 F5 d. e5 T
2. 制备PEI-DNA 混合物：以60 mm 组织培养皿用420 μL 反应总体积为例。准" a% |1 m! N3 J. J
备两支1.5 mL 离心管，一管将质粒DNA（总量2-8 μg 为佳）加入240 μL HBS+ d3 T# r# L6 D/ P
中，混匀。另一管中则用HBS 将100 μM 的PEI 储存液稀释成10 μM，充分( z2 i2 V! D/ G0 E, p6 o
混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中，充分混匀后) c9 L$ `- K% p' y. }6 O, ?/ \
室温静置20-30 min。最后将这420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层
! N$ V  ?- D% v3 m( {( U8 M+ X细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％ CO2 的37℃ 温箱
. ?+ i# w6 e8 S( F2 d& Y0 g6 F8 {孵育。

plasmid

磷酸钙转染 自己配试剂的话 一要试剂纯度高 二 pH值要精确 比较麻烦

听不到

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) i  `) A! Q8 L: X# L, H& k& I  W请问你做过吗？有木有什么可传授的？