求可行的磷酸钙转染方法

听不到

老师一直在摸索磷酸钙转染方法，特别麻烦，很浪费时间，但是结果始终没有阳性的，实验也迟迟不能推进，但是看网上各位同学提起磷酸钙转染都很容易的样子，求具体操作方法

weijunning

磷酸钙法转染确实不好把握，需要的技巧性比较高，并且转染效率也不高；建议使用PEI进行转染，易操作转染效率高，并且成本也不会很高。

不倒翁

同意楼上 简单 成本低 可重复性好

hwlightning

我以前一直用磷酸钙转染293细胞，转染效率一般80%左右。转染试剂的具体配方因好久没做那行，忘记了。我到时候找找，有的话就发给你。

julia20

我把磷酸钙转染的配方放到我的相册里了, 你能看见吗?

听不到

回复 julia20 的帖子) g7 q' C( E5 T" M/ c; o" {# r! G

6 n! S9 k: ]4 Q% u! a& _0 ]$ q打不开啊，没有权限...

听不到

回复 hwlightning 的帖子9 z: R+ z; p2 }7 @3 C0 A" m
% D! o/ Z2 v( p/ |
好的，谢谢啊~

听不到

回复 weijunning 的帖子
9 Y7 h1 r2 K# ?9 b0 J5 Z! v: Y4 R8 S* t9 z+ D
我在网上搜了一下PEI转染法，你看这个方法合适吗？- |9 d! z) {) Q3 u* C) G. z" Z9 L
1细胞贴壁后可进行转染，转染前换为无血清培养基。' f$ \% A* X+ {
2. 制备PEI-DNA 混合物：以60 mm 组织培养皿用420 μL 反应总体积为例。准3 H! ^( Y. E7 X& [2 C) P) g
备两支1.5 mL 离心管，一管将质粒DNA（总量2-8 μg 为佳）加入240 μL HBS
! h& D  d) J; R# }" i; g7 e中，混匀。另一管中则用HBS 将100 μM 的PEI 储存液稀释成10 μM，充分4 n5 b6 R5 k# Z1 f
混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中，充分混匀后' f" `' G2 d: D8 ~: \7 [: @
室温静置20-30 min。最后将这420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层
' |; B2 K' |% o# m/ i. i细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％ CO2 的37℃ 温箱
- I/ s9 y0 h: S% Z孵育。

plasmid

磷酸钙转染 自己配试剂的话 一要试剂纯度高 二 pH值要精确 比较麻烦

听不到

回复 plasmid 的帖子3 j0 j' s, U- m  r# s0 f
6 s  f& Q2 T; H! m% Q9 D: P# I  k
请问你做过吗？有木有什么可传授的？