求教：脐带间充质干细胞胶原酶消化后有大量细胞但养不活怎么办

edwardellen

做脐带间充质干细胞分离，脐带去除血管和羊膜，剪碎至小块，用同等体积的1mg/mL的Ⅳ型胶原酶消化2.5-3小时，加30%体积的血清终止，之后用PBS稀释4倍后离心，2000转10分钟，弃掉一半上清，继续用PBS稀释，重复离心，一共洗4次，可以收获很多细胞，大小上看应该是间充质干细胞，肯定不是血细胞，用10%血清的DMEM/F12培养基培养，血清是德国的，细胞第二天贴壁少，几天后很多死亡，只能残留很少一部分，形态也不太好看。这是什么原因，求赐教。
9 S5 R' X+ j" U0 m5 f. t/ b另，大家是如何去除红细胞的？每次我拿到的脐带动脉里总是有血，红细胞很多，要换两次液才能去除干净，红细胞存在对间充质干细胞生长是否有影响？" `$ P+ d5 Q' c6 X5 I. s) o
多谢多谢！

edwardellen

回复 伊诺强 的帖子& l1 y; g0 F5 l* v
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之前我没有清理血就直接去血管，下次我试试先把血清理干净，谢谢！

edwardellen

回复 月_幻影 的帖子$ Y, Q; c5 n8 i6 n/ d9 o. W; ^! Z

4 j+ E1 l9 w  ?1 y8 `谢谢！还想请问一下，您做的时候转速是多少啊？我以前做过1000，但是感觉细胞有点下不来，可能是就是胶原酶消化以后的液体特别黏。我看有人用透明质酸酶再次消化的，请问您试过么？

edwardellen

回复 flylover1221 的帖子
" l$ A# ^$ R# E! j" }1 ]3 c; M) H: I7 D8 {; C# y( j7 R+ }/ D( ^
谢谢，请问你们过的是哪种滤网？我这有铜网，可以么？

edwardellen

回复 a352167963 的帖子& D4 z; d6 I/ |, D+ R5 I" ]

) F. H5 _# W5 n; m* L7 P谢谢！
3 Y7 [$ s- V9 ~$ m( i请问您用的是哪种胶原酶？我用的是sigma的 Ⅳ型胶原酶。