关于诱导的软骨细胞pellet切片

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关于间充质干细胞软骨pellet诱导，诱导后的pellet怎么做切片。有说冰冻切片的，步骤入下：- ]9 g& F8 H9 C, k" V
1、4%多聚甲醛固定24小时。
* R: |+ }) g2 r, S' s' O2、20%蔗糖脱水至沉底。) `, i. b9 ~3 [
3、沉底组织OCT包埋，-20度恒冷箱中切片。
& T% m' R7 p" k8 f请问哪里是欠缺？有说的梯度浓度蔗糖脱水，各个浓度分别多久？# K1 k7 {" x$ z% ]
还有石蜡包埋切片步骤如下：2 k, W  F: c3 N5 c: M# @. u& v! k
1、福尔马林固定。( N6 w' G/ P9 p
2、脱水：50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%乙醇(90min) →95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。# t. v) S' }+ J% @' ?2 P
3、透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯 → 二甲苯 → 二甲苯，每步60min。
9 L+ v: n- @' Q- ^- `, R6 q; I4、渗透： 1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min),62℃。* m6 J" X/ `* i$ B* V" b
5、包埋：将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
. S+ @8 V# I) o6、切片、贴片。' u1 C- R3 T- L3 W: x
步骤是否正确？
8 i  E% e3 |; Y$ o9 U# ^# r请问这两种方法效果是否有差别？非常感谢！