2014年 Nature scientific reports上的一篇关于“重组蛋白诱导iPSCs”的读后感

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wanglimaomao 发表于 2014-4-1 17:02 $ G  Y5 p; g; j7 g
我对蛋白重编程不是很了解。但是针对不能扩增传代有点想法。也不一定正确，欢迎批评指正。首先体外合成的蛋 ...

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即便将4个基因整合到基因组中，当细胞向ipsc转化过程中，外源表达的基因会逐渐被沉默的，直至最后完全沉默。与此同时，细胞内源性的干性基因会逐渐获得表达。

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感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

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不好意思，昨天没上传上去

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回复 Andyhigh 的帖子& q" }3 H+ W( L1 \* K# ]* V1 [
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楼主好厉害。我不是作者，把文章down下来一直在偷懒没有看，还搞错了文章内容，真的好惭愧。。。。
1 `6 |7 g* Y  w: |先不说话，赶紧看文章+ x5 i1 z  F4 s" f% Z
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Andyhigh 发表于 2014-4-6 15:17
  T% F. m) B% e  @( `. O9 X您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！
5 l( K7 w9 p# D) `& S我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希 ...

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实在汗呐，下了文章后匆匆瞄了一眼摘要，跟Andyhigh一样，一开始也以为是用四因子蛋白诱导鸡细胞重编程的。大家都在热火火的用转导肽介导四因子造ipsc，这篇文章的作者反其道而行之，由此想到利用转导肽融合的干性因子去阻止鸡ESC在传代过程中多能性丢失，这是做ESC培养基研发的节奏啊。Andyhigh兄已经对文章评价的非常到位了，不多说了。
: `0 }8 \- U3 w* m文中中超声破碎细胞的溶液应该是PBS吧（cells were washed twice with PBS and then ultrasonically disrupted），若有其它特殊的缓冲液应该会在方法中说明的。
/ B7 Z0 U; J: H) N% ~293FT的转染效率，文章中也没说，但我利用lip2000转染过293FT（文章用的磷酸钙沉淀），效率超高，90%以上了，24小时的GFP几乎就全亮了，48小时达顶峰。
& w6 R& ]0 h! Y) z' c) q3 v/ ?质粒线性化主要是为了稳定细胞系筛选时便于DNA片段插入基因组，瞬时表达时对转染效率和表达量并无助力，所以文章中估计没有线性化。
. x7 ]4 L6 ^0 n$ t人和小鼠的ESC是有可长期传代的细胞系的，这个大家估计都知道，置于其它的俺是小白，就不清楚了。倒是可以查下大鼠，果蝇，猪和牛是否有ESC细胞系。

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回复 Andyhigh 的帖子2 y4 a8 A' W! O/ d( I5 a0 n& O
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权限不够，还加不了好友。有机会多就ips 聊聊