间充质干细胞的培养问题

小样

我培养的原代细胞冻存前状态很好，可复苏的时候几乎不生长了，整体观察如刚刚传完带一样，细沙状，镜下观察细胞，似乎细胞内呈碎片状态，请问怎么样能让细胞生长稍微好转？

zhen022

重新分原代吧，估计冻死了！

569981454

细胞死了没办法。是不是复苏过程没注意，一般不会出此现这种情况啊

郭丽杰

细胞已死。考虑一下是不是冻存保护剂的问题，降温梯度是不是正确。还有你确定冻存前状态良好吗？细沙状？没污染？细胞不可能是细沙状的呀，要是严重污染了也不会长的呀

haibara007007

最好不要在原代就冻细胞，原代本来细胞就少，而且纯度不高，活力各方面都差一些，建议还是传一两代再冻看看，如果还不行就是你冷冻或复苏有问题了

月_幻影

原代细胞本就刚刚开始生长出来，相对后面的一般是不建议冻存的，冻存了复苏率也不高，一般是选择处于对数期的细胞冻存，我们一半是从P2或P3代开始冻存细胞的，再就是不知道LZ的冻存液是什么情况呢？

lic126

个人觉得无非就两个环节出现问题，一个冷冻过程，一个解冻。冷冻注意参考相关文献选择合适的冻存液，然后冷冻的过程要注意，我们有次忘移细胞，在-20度过夜了，后来复苏，活率就只有不到50%了，然后解冻过程，合适温度，尽快解冻。总的就是慢冻快苏。

leaderhou

我们的冻存液是用的90%血清+10%DMSO，效果挺好的，不过一般都会传上1-2代再冻存，以去提高纯度

xiaoyuwsp

其影响因素有：冻存细胞细胞数量和状态，最好不原代冻存；冻存方式，包括冻存试剂及浓度、冻存降温方式和冻存温度；复苏，即复苏的温度、复苏时间的控制；还有复苏后细胞的处理。

cloudy1234

细胞死掉了，原代细胞本身就不多，建议传1-2代再进行冻存