慢病毒包装的流程和注意事项——理论和实践总结

suxiaomei

看了很多家公司的资料也做了一些实验，现已经得到不错的结果，特总结如下：5 V, N8 a' K% F
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1，2.0包装系统的PAX:MD大约2:1或者3:1，转运载体的用量是前二者之和，比例很重要。1 o9 A+ [, E% P- y8 }+ X
2，转染效率没有问题的话，理论上293FT比293T包毒能力更强。
1 p  F) X# o- a7 ?  [/ d: ~3 @" M7 m3，收病毒上清的程序是:转染24h后换液，之后每隔24h收一次，总共可收3次，理论上48-72h的阶段是病毒产生的高峰。,
3 z# j" Z$ c) [9 Z2 @4，然后用超速离心或者SBI公司的PEG-IT进行浓缩等等，浓度病毒放存-80，冻融一次，病毒滴度降低一半。
; `7 C; T! @3 U7 \5，最后，感染时候，细胞处于分裂期最好，密度在50左右，感染时血清存在影响不是很大，但是无血清会加快感染（本人亲测）可添加polybrene（4-12ug/ml），感染时，培养液的量仅仅覆盖细胞表面最佳，有报道称将培养板离心，感染效率将大幅提高。4-6h后，补充培养液体积至标准体积。如果一次感染效率不高，可12h后进行2次感染。; b* B7 S- f- a+ ]+ v% A

! E% ~# a. h6 B( H9 h总之病毒的滴度是最关键的，高的病毒滴度，高的polybrene，以及无血清感染是可能有毒性的，GFP摸索一下。附一张感染后48h的GFP照片：' e9 b( W/ E! y2 U
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