慢病毒包装的流程和注意事项——理论和实践总结

suxiaomei

看了很多家公司的资料也做了一些实验，现已经得到不错的结果，特总结如下：2 H, U& E- e2 v* j
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1，2.0包装系统的PAX:MD大约2:1或者3:1，转运载体的用量是前二者之和，比例很重要。7 o8 R# w2 v( z! y/ M! @
2，转染效率没有问题的话，理论上293FT比293T包毒能力更强。* z  I/ W; u; l. C! W- c: y. F
3，收病毒上清的程序是:转染24h后换液，之后每隔24h收一次，总共可收3次，理论上48-72h的阶段是病毒产生的高峰。,3 j4 \% ^1 K+ e7 K- _) S) A& z
4，然后用超速离心或者SBI公司的PEG-IT进行浓缩等等，浓度病毒放存-80，冻融一次，病毒滴度降低一半。% Y# f5 Z  w, N2 A; u" H
5，最后，感染时候，细胞处于分裂期最好，密度在50左右，感染时血清存在影响不是很大，但是无血清会加快感染（本人亲测）可添加polybrene（4-12ug/ml），感染时，培养液的量仅仅覆盖细胞表面最佳，有报道称将培养板离心，感染效率将大幅提高。4-6h后，补充培养液体积至标准体积。如果一次感染效率不高，可12h后进行2次感染。$ {# ?) ?; R9 o
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总之病毒的滴度是最关键的，高的病毒滴度，高的polybrene，以及无血清感染是可能有毒性的，GFP摸索一下。附一张感染后48h的GFP照片：
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yaolinzhang

293T细胞的质量，接种密度及质粒浓度也很重要；抗生素对病毒的影响也不小；病毒暴露时间

轻裳曼舞

受益良多，多谢

liuyasi2008

多谢，正准备做转染的

张月儿

回复 liuyasi2008 的帖子6 L9 {- t8 c! H: j9 B( E
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很好的建议！谢谢！