关于胚胎干细胞消化用accutase的中止消化问题

shaozi402

我们胚胎干细胞的消化用accutase，用培养基中止消化；但是发现这样有点浪费培养基，培养基很贵的。考虑是不是可以用DMEM/F12来替代胚胎干细胞的培养基来中止消化呢？或者可以用其他的试剂来中止消化？求解，谢谢！

ghy529529

传代是消化成小的团块还是单细胞？

细胞海洋

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BSHT1994

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& o, X0 E/ A5 I* |. @# c) D& _5 Z& L# t1 `0 F
你好，我想请教个问题，消化结束加入培养基稀释，就直接计数接种了吗？不需要离心吗

yeungfan

加入等量DMEM/F12终止消化就可以

watchen198891

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, a6 ^/ I8 S3 R2 C  g) T- K" L
好的，谢谢，我已经试过了，现在细胞也长起来了。

shaozi402

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( }( L! h; [! U! ?: U' [7 p
" R" O  n% X; P* A用原液消化

watchen198891

回复 shaozi402 的帖子- Q2 I; d% x+ G/ t0 X5 Y, f

8 O9 s- A: ?3 ?8 a) k我想请教个问题，这个酶的使用浓度是多大？

kasaya

Accutase消化细胞根据细胞类型一般是2-5min，第一次如果不确定的话，可以隔一分钟看看细胞分离的情况，一般看见被消化的小细胞团块飘在培养基中就可以通过稀释accutase终止消化了，使用DMEM就可以，然后轻轻地将细胞吹打成单细胞。Accutase虽然很有效率但是对细胞损伤较小，所以可以等细胞被消化成小团再进行吹打，因为为了成为单细胞用力吹打的机械损伤很可能比酶的损伤还大。

shaozi402

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3 Y4 O. H' f/ V2 J大都是单个细胞了。