关于胚胎干细胞消化用accutase的中止消化问题

shaozi402

我们胚胎干细胞的消化用accutase，用培养基中止消化；但是发现这样有点浪费培养基，培养基很贵的。考虑是不是可以用DMEM/F12来替代胚胎干细胞的培养基来中止消化呢？或者可以用其他的试剂来中止消化？求解，谢谢！

Jonathan

早就说过这个问题了。accutase不是用培养基终止的，你加培养基，只是把accutase稀释了。我一直用F12稀释，一直没问题

sc-cxw

accutase消化不需要终止消化，换种说法即说消化到最佳时间时，只需要加入相应的适当体积的培养基继续培养即可。

shaozi402

回复 Jonathan 的帖子3 R; K1 U: Q2 T
9 F- Y4 L6 x! R7 d1 {
我用F12试了一下，确实可以。

shaozi402

回复 Jonathan 的帖子4 S& b  `5 I  V( q
5 g5 o# o( A0 k* t  n+ o
谢谢

shaozi402

回复 sc-cxw 的帖子
5 u2 S* D) @6 B4 ^, Q9 y8 c
- S1 D5 {+ B& F4 }不需要离心去除吗？
8 v( G* W6 ~, Y8 l; |3 `

sc-cxw

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, J( W6 m2 j7 |3 b, _3 ~& ^
; J% Z* A2 T  |+ g不需要

bubble_w

请问accutase消化到什么程度终止消化最佳？是把细胞吹下来，还是刮下来？

shaozi402

回复 bubble_w 的帖子0 l6 H( `9 c2 T

) j: d/ s: Y' V. X克隆球周边卷曲，大约3-5min，即可用细胞吹打下来。

bubble_w

回复 shaozi402 的帖子8 k1 a( p* Z7 S+ X% \
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吹打下来之后 克隆是小的团块还是已经变为单细胞