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求助:干细胞诱导分化   [复制链接]

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楼主
发表于 2014-5-15 16:50 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
各位前辈好,我最近做MSC诱导分化实验,向成骨和成软骨细胞方向分化成功,但是向成脂肪细胞分化不成功。这个结果说明什么?我已经验证过了,成脂诱导液没问题。希望大家能提点一下,不胜感激!
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沙发
发表于 2014-5-19 10:48 |显示全部帖子
回复 levell 的帖子7 }" ]  ^' N: [; M: k/ t

8 L  b! }$ k$ @9 r4 ]/ N0 i& S诱导方法严格按照GIBCO的说明书,就是选择五代以内的MSC接种到12孔板,等到细胞融合度达到60%时换成诱导液,每隔3天换一次诱导液。到7-14天就应该有结果。但是我都到22天甚至更久还是没有。。。相比之下同期的脐带源MSC成脂诱导就非常好,在第6天时就看到大油滴。
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藤椅
发表于 2014-5-19 10:52 |显示全部帖子
回复 luyue6453 的帖子% D' T; l0 t& i2 c! G9 _2 ?5 b
* L# Q8 W2 c! A( y7 E$ Q
我是从CIBCO厂家直接买的诱导液,诱导液没有问题,因为同期的脐带源MSC成脂诱导效果就特别的好。胎盘源的MSC成脂诱导就死活做不出来,已经做了3-4次了,细胞密度,代数。。。都调整过了,就是没有结果。现在急得要命,也不知道哪里出了问题???是不是我的细胞有问题?
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板凳
发表于 2014-5-19 10:54 |显示全部帖子
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回复 青云之上 的帖子
- a& H1 R2 ?% V( A1 H. {6 K6 _+ _# i1 O3 c/ r
如果诱导培养基和方案都没有问题,那还有别的原因吗?因为诱导液我已经验证过了,它能诱导脐带源MSC成脂肪细胞,胎盘源的MSC一直做不出来

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报纸
发表于 2014-5-19 12:28 |显示全部帖子
回复 sunnyhuan0629 的帖子: L3 D" f# c" p9 y
( X  x. a" h6 ]$ Z
我用的是CIBCO的成脂诱导液,应该不是诱导液的问题,因为我用它诱导脐带MSC就成功了,方法一样。如果MSC能诱导成成骨和软骨细胞,那按道理说也会诱导成脂肪细胞的是吧?细胞应该没有问题,只是我的方法不对?
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地板
发表于 2014-5-19 12:43 |显示全部帖子
回复 luyue6453 的帖子) R9 s$ v& D3 T% ^

0 Y- v, C0 U- o" S  I; |! ]长势挺好,密度也有调节,固定时用的4%的多聚甲醛。

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发表于 2014-5-20 11:01 |显示全部帖子
回复 sunnyhuan0629 的帖子
5 b1 Y8 e8 n( u1 n4 |; P) j7 _& Z# P9 d6 I# ]2 }7 ~- S
不好意思,帖中忘记标记了。是胎盘源间充质干细胞和脐带源间充质干细胞诱导分化。其中成脂诱导时胎盘源MSC诱导没有成功。我再重新试一次,估计是我操作的原因。
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发表于 2014-5-20 12:27 |显示全部帖子
回复 青云之上 的帖子
/ }0 S/ D) D6 b
. H2 \0 D2 t. c4 K4 X谢谢您,我再试试

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发表于 2014-6-19 11:25 |显示全部帖子
回复 suning5 的帖子1 F# h1 z5 O  ^/ [7 ]9 w+ l% Y: I* u
  j8 Y7 B, r' C2 K
谢谢您,我做出来了,确实是需要时间比较久,大约4周多
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发表于 2014-7-25 09:50 |显示全部帖子
回复 getingting 的帖子
  `& V+ \8 V/ a% p8 A- [( ^& @3 q" s
成骨诱导方面:我用的现成试剂盒诱导液,没有发现细胞剥离现象,等到21天染色时候细胞还是挺好。你在换液的时候要小心,轻轻的。' d9 t9 {! ~' M# Y$ I! I$ f
成软骨诱导:我用的是24孔板,现象明显后采用阿利辛蓝染色和目的基因检测。
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