拟胚体实验

a279915845

求助：哪个大神能提供一下拟胚体实验的详细步骤啊，我做EB时怎么没几天就贴壁分化了呢，中间需不需要别的处理

scottist

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hiPSC和miPSC步骤 不一样，不知道你养的是哪一种？

a279915845

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我养的是大鼠iPS细胞，求详细步骤，谢谢

scottist

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' v, p/ G' _9 g% w. U" Y5 dmiPSC直接加入到分化液中即可，用低吸附培养皿或培养板，密度最好不要太高；hiPSC最好在低吸附的培养皿或培养板中加ipsc培养液中继续培养12-24h，形成一些细胞团后，再移入分化液中培养，这样形成EB的数量更多一些。你养的没几天就贴壁分化了可能有两种原因：1，培养皿或培养板低吸附处理效果不好，我们用的corning的低吸附6孔板从未出现EB贴壁的情况；2，EB密度过大，出现粘连，最后形成一大团，下沉贴壁，这样的话减少一些密度，或者经常摇动。

zm19900508

选低吸附的培养皿或培养板，我们用分子克隆实验使用的平板，挺好

a279915845

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# E5 @1 b% ?" x' G; N, J非常感谢你的帮助，我使用的是普通的低粘附的6孔板，如果是6孔板一般您按什么密度铺啊，中间换不换液啊，怎么换液啊，离心？分化液就是去除LIF的ES营养液吧？

scottist

回复 a279915845 的帖子3 p! u( I3 m' D
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miPSC的话，6孔板每孔加2X10的5次方，换液有人采用半数换液，这样貌似损失很多，可以用离心换液，最好不要用枪头，用移液管，轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM，只去掉LIF，还加KSR的话，分化效果可能不如加FBS效果好。

scottist

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- j7 M* S! a  u5 x9 G. r7 SmiPSC的话，6孔板每孔加2X10的5次方，换液有人采用半数换液，这样貌似损失很多，可以用离心换液，最好不要用枪头，用移液管，轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM，只去掉LIF，还加KSR的话，分化效果可能不如加FBS效果好。

scottist

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: K0 u9 d- l' j  `9 Y& a, G5 h; u: a  p8 k8 ]
miPSC的话，6孔板每孔加2X10的5次方，换液有人采用半数换液，这样貌似损失很多，可以用离心换液，最好不要用枪头，用移液管，轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM，只去掉LIF，还加KSR的话，分化效果可能不如加FBS效果好。大鼠iPS我没养过，EB培养步骤就不敢妄言了。

a279915845

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非常感谢您