请问一下，如何确保6孔板中每个孔加50个肿瘤细胞？

仰天

不知道你细胞生长的是否很密，像我的话细胞比较密，每次计数前我会先稀释10倍或者20倍，这样计数的时候细胞不会太密，比较好计数一些。计数完了以后比如你要接8个孔，你可以计算10个孔需要的细胞数，然后补充培养基充分混匀后吸相应的体积加到孔里面。这样比你一个个孔加50个细胞会更准确一些，毕竟50个细胞有点少，枪头稍微残留一点的话误差会比较大

仰天

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& D( }4 G. Z2 ]0 E我们细胞计数都是用计数板的，就是一个载玻片和一个盖玻片，显微镜下在载玻片的中央位置是计数位置，该计数位置有四个大正方格，每一个正方格又由小的16个正方格组成。计数的时候盖上盖玻片（盖在计数位置上），吸取10μL的细胞悬液打到载玻片和盖玻片的间隙中，不要有气泡。然后你计数，举个例子你在四个大方格计数是10，20,15,15，那你最终的细胞数是这四个数相加除4，然后乘以10^4，即15X10^4/mL，也就是说你计数的原液中，每mL中含有15X10^4个细胞。然后你再根据你要加的细胞数计算你要吸取的体积。

仰天

回复 cyz3057 的帖子# E. P; D7 _% Y# A; b/ k% h

; d4 l- b* P2 F6 l' N可能是我做的不够严谨，对于同一种细胞如果要几瓶或几皿一块消化，混合起来一块离心的话，我还真没有考虑过不同瓶子或皿中细胞的差异性。如果需要考虑差异性的话，能告诉我为什么吗？谢谢！

仰天

回复 cyz3057 的帖子" i7 W6 _3 G4 g. X# n/ U

$ H, _# `- g8 }) J  E谢谢，因为没做过生长周期方面的实验，所以对这方面就没注意过。