请问一下，如何确保6孔板中每个孔加50个肿瘤细胞？

cyz3057

如题目所述，现在做细胞，看文献有说要每孔50个细胞，这个换算下来应该每孔加多少ul的单细胞悬浮液呢？

碧螺春的秋天

先计数，看悬浮液里细胞密度，然后根据密度和所需要的细胞数目算出应加体积

genedu

计数比如说 10*6 / 1ml，然后按照梯度稀释法，注意不要稀释过度，按照10倍的稀释最好（100μl-900μl），注意每次都要充分混匀，最后补充至2ml培养基，铺板即可

tiramisu

先按照细胞浓度稀释相应倍数，再用细胞计数板显微镜下计数。

仰天

不知道你细胞生长的是否很密，像我的话细胞比较密，每次计数前我会先稀释10倍或者20倍，这样计数的时候细胞不会太密，比较好计数一些。计数完了以后比如你要接8个孔，你可以计算10个孔需要的细胞数，然后补充培养基充分混匀后吸相应的体积加到孔里面。这样比你一个个孔加50个细胞会更准确一些，毕竟50个细胞有点少，枪头稍微残留一点的话误差会比较大

cyz3057

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0 l4 x4 l5 z1 Y" D1 q) k
; A) j/ Q4 ~+ v& L) z* d4 k嗯 好的

cyz3057

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9 P/ u5 c& {: D) I6 _3 b& ?$ p0 A* _" G5 B/ \! R# t9 Z. F
哦 不好意思 这几天实验忙的 再请教一下哦 那我现在要计数培养瓶内的细胞数 里面有3ml的培养基 我消化后 离心 用3ml培养基重悬成单细胞悬浮液 取多少体积的细胞悬液用来计数呢

cyz3057

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) z4 C* N( j7 I. T* }; W' _- l# R- _" H9 c& ?8 x1 H  e1 I  C
恩恩 thanks

cyz3057

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  u( o: P& r7 ?$ }  J( }哦 谢谢哈 我的细胞昨天看了下 基本能长到70%左右的样子 我不大知道在计数时滴多大体积的细胞悬液 网上都说滴一滴 这样到时怎么能够知道滴了多大的体积 那总的细胞数又怎么知道呢

仰天

回复 cyz3057 的帖子5 X* q1 f( L8 C  S2 g7 G

3 |$ M+ h- S( m1 |+ k- W2 Z8 I' Y我们细胞计数都是用计数板的，就是一个载玻片和一个盖玻片，显微镜下在载玻片的中央位置是计数位置，该计数位置有四个大正方格，每一个正方格又由小的16个正方格组成。计数的时候盖上盖玻片（盖在计数位置上），吸取10μL的细胞悬液打到载玻片和盖玻片的间隙中，不要有气泡。然后你计数，举个例子你在四个大方格计数是10，20,15,15，那你最终的细胞数是这四个数相加除4，然后乘以10^4，即15X10^4/mL，也就是说你计数的原液中，每mL中含有15X10^4个细胞。然后你再根据你要加的细胞数计算你要吸取的体积。