求助-小鼠颗粒细胞传代

moluxingke

最近做小鼠颗粒细胞的体外培养，常规刺破有腔卵泡取coc，消化后培养颗粒细胞，很多方法都是提到透明质酸酶或是反复吹打使颗粒细胞和卵母细胞分开，想请教一下，如果说培养的时候不移去卵母细胞，而是将卵母细胞和颗粒细胞共培养，会对培养的颗粒细胞有什么影响？  培养的原代颗粒细胞可以传代几次？有做的人分享一下经验呗。

moluxingke

回复 monk125 的帖子: p. O% ]; f) E. d3 a# @5 d6 }

9 {; t% U; K1 D前段时间一直没有再做颗粒细胞培养，不过这几天又开始了，现在方法依然不太成熟，我现在打算这样做：首先是小鼠超排，然后刺破卵泡，先把COCs给拣出来，然后吹打使卵丘颗粒细胞散落下来，将这些颗粒细胞单独培养。对于刺破卵泡后残余的颗粒细胞和卵巢碎片混合物，我用细胞筛滤了一下，将那些大的卵巢碎片出去，剩下的大部分应该是颗粒细胞了，当然里面肯定混有其他的细胞类型，然后培养。然后将两组细胞比较一下，检测一些颗粒细胞markers的表达，看看差异有多大。
( q5 t# i4 ]* i# E/ T, D只是还有一个疑问，壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞在体外培养的情况下，它们的特性是否恢复一致？

monk125

这边实验室 是用体视镜取出卵母细胞 然后剩下的颗粒细胞再用淋巴细胞分离液收集 我用FSH CD45这两个标记测过纯度，大约收集的颗粒细胞纯度约80%-85%，会有淋巴细胞污染。我们也在想办法进一步提高颗粒细胞的纯度，如果你有更好的办法，欢迎指教。

monk125

我看到过一篇science 说是颗粒细胞与卵母细胞共培养的 卵母细胞在有无颗粒细胞情况下都会自然成熟  另外，我见到别人养的颗粒细胞一般都是培养72小时就不养了 估计如果不加特殊培养条件 颗粒细胞会分化或者凋亡吧

apsuifeng

首先更正一下，这个叫法是不科学的，准确来讲应该叫卵丘细胞，这个细胞培养起来应该是比较简单的，如果与卵母细胞一同培养，有一个问题，培养基你应该用什么呢？我原来培养卵母细胞时会暂时不吹打，培养8个小时时吹打是比较好做的。不知是否解答了你的问题。

aulenuyah

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+ u) L+ H. x( B. @( f' k% l& E% A7 L
, Q3 Z7 ?+ R! ]  k# z卵母细胞和卵丘细胞共培养后，卵母细胞会成熟，而卵丘细胞会发生凋亡。所以最好别这样培养

moluxingke

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7 X8 k+ i9 w5 t2 r9 `: [; n/ T$ y' F4 p$ P( p/ J
谢谢，在培养的第一天没有把卵母细胞分离出来，然后等颗粒细胞贴壁了，第二天换液的时候才将卵母细胞移除，对颗粒细胞的生长有影响吗？$ \& N$ Q3 Z1 `( e0 u0 n: i2 S

aulenuyah

回复 moluxingke 的帖子. d5 G0 z6 l+ k  q3 s& B

! [- w8 V2 o8 Z/ J) ?' T如果轻轻刺的话，可以忽略的，而且你说的这两个细胞的原代比较难养，就算有也会很少的

moluxingke

回复 aulenuyah 的帖子5 D! `0 F7 s& P( J8 f' S& [

3 }4 K1 H% R; r0 ^% x$ z  C# x这样也可以？剩下的小碎片里面不会有其他细胞污染吗？比如卵巢表皮细胞或是膜细胞等？主要就是担心这个。

aulenuyah

回复 moluxingke 的帖子$ _; a9 [+ ^8 i4 L) g: u
, U. x9 I  z+ n3 u: [
这就要看你到底要收集什么细胞了，如果只需要颗粒细胞，而且不分到底是卵丘颗粒细胞还是壁层颗粒细胞的话，是可以收集的。! j( y( M0 v3 L% Q
如果你有体视显微镜的话，可以直接在显微镜下把大块的碎片捡出去扔掉，剩下的基本上就是颗粒细胞了。