求助 关于大鼠骨髓间充质干细胞成长问题

听不到

我提取了好几批BMC，可是问题都是长得特别慢，而且原代的细胞养几天就死的特别多，我的操作步骤是：取得胫骨后以注射器吸取DMEM（10% FBS）冲洗骨髓，至骨腔泛白，吸取细胞悬浮液置于培养瓶中，培养箱中静置，约2天的时候进行全量换液。细胞原来长得挺好，贴壁的特别多，可是没几天就死了大批，然后贴壁的逐渐就不贴壁了，有的能贴壁的传代之后长得也特别慢，看细胞状态很像是老化了...愁死了，求助有木有大神能给点建议啊，对了，我是一个大鼠的胫骨贴一个50ml培养瓶的。

hades3479

用进口胎牛血清，把血清浓度提高到15~20%试试看

听不到

回复 hades3479 的帖子- ~1 H0 f  |0 V) B7 J3 T1 J

( j9 _1 d8 F  n0 ~  b9 w. H) z血清用的Gibco的，可是血清浓度高了不是容易分化吗？还有我现在的已经老化的细胞是不是就没救了，只能新取了？而且我看有人说消化的时候取易消化的，那意思是难消化的不要了么还是咋地？

倒腾细胞

回复 听不到 的帖子  J2 F4 z9 n6 y: h2 M0 }# b
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可以试着用下15%的血清浓度 半量换液  老化了的肯定是没得救了  难消化有难消化的原因所在吧

sysuhoo

楼主给的信息还不够，但根据描述应该是换液造成的影响，相对于小鼠，大鼠的MSCs还是比较好养的，如果没有经验的情况下，建议用半量换液的方法，进口或者国产血清对大鼠的影响不大，但浓度确实有比较重的影响，建议20%左右较好。

听不到

重新取了MSC，原代的时候用15%血清培养的，然后F1代就用了10%血清了，细胞长得挺好的~