小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正

hyde

刚开始以为这个区是技术讨论区，后来感觉像文献交流区哈…
9 \, d8 R" P, `# Y- p1 i4 `6 f5 p准备练习一下小鼠骨髓移植， 整理了一下protocol ，不知道可行性如何 ？ protocol 整理.zip (5.63 MB)

2014-6-23 21:47 上传

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hyde

求实战者指导改正) h/ R" ?9 ^( n8 f3 H. N* }! B+ H* f1 m

goblinwang

一只老鼠可以得到10X7的细胞，受体只需要2-10X10X5就行了，C57小黑鼠做尾静脉，难度大，手法需要练习，注射器最好不要用1ML的，针头太细，冲骨髓的时候，容易产生机械损伤，致死剂量照射，未处理的话，一周开始死亡，我是一次性照射10Gy,照射的时候最好密封无菌处理

hyde

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如果分离的细胞不进行流式分选出干细胞也只需要这么少细胞吗?

hyde

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6 ], C6 f: d: `" `% U% j0 L小鼠的性别有关系吗- f& b6 C- ~# P1 [9 ]% [

sysuhoo

按照我们实验室的经验，Co60照射与你的实验目的有很大的相关性，看你是做半致死还是致死，而且更重要的是剂量没有定论，一般来说体重和周龄对于照射剂量非常重要，我们的经验是20g左右，8周龄选用8.5Gy比较好。最后的成功标志以嵌合率在85%以上为成功。
0 x& ]: s2 u2 J3 x( G* G6 h3 b另外小鼠的性别对实验的影响不大。

hyde

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嵌合率如何判断？取细胞做流式分析？

goblinwang

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9 }3 {- i! P+ y3 J1 R; K
按理论看，每10X5个BMcell就含有一个HSC，而一个HSC就足够重建整个造血系统了，性别最好一致，不过获得的细胞含量，没差异，受体鼠，最好用公鼠，至于嵌合率，那你是用CD45.1和CD45.2老鼠进行BMT，这样也只能流式了
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hyde

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1，关于抗生素，国内外环境不一样，国内一般用的比较重的药物是吧，有什么推荐的？有文献说ph水太酸小鼠会不太喝。  需要每天换饲料换水吗？
7 p0 E7 t# F( P2，有的文献说分离骨髓细胞的缓冲液不能加FBS，有些又可以，（最后重悬的不能有血清可以理解）-------我的理解是开始分离的时候可以有，后面快注射前的几步清洗就要去掉，防止对小鼠的影响？

goblinwang

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抗生素，你看参考文献就行。这应该没什么问题，我的水不是酸处理的，不用每天换。FBS的使用，我的理解和你一样，