小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正

hyde

刚开始以为这个区是技术讨论区，后来感觉像文献交流区哈…
& s& |2 [9 y! k" D9 M, O准备练习一下小鼠骨髓移植， 整理了一下protocol ，不知道可行性如何 ？ protocol 整理.zip (5.63 MB)

2014-6-23 21:47 上传

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hyde

求实战者指导改正2 v$ G. S! t. X2 U: L% O4 o* U, x

goblinwang

一只老鼠可以得到10X7的细胞，受体只需要2-10X10X5就行了，C57小黑鼠做尾静脉，难度大，手法需要练习，注射器最好不要用1ML的，针头太细，冲骨髓的时候，容易产生机械损伤，致死剂量照射，未处理的话，一周开始死亡，我是一次性照射10Gy,照射的时候最好密封无菌处理

hyde

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4 B' L- y% K) j2 U
! I# c5 }2 V; I) m( _$ d如果分离的细胞不进行流式分选出干细胞也只需要这么少细胞吗?

hyde

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* U; j+ q" ]8 e# ~2 J' |( c小鼠的性别有关系吗6 |2 D/ T, S3 c0 L! {* C

sysuhoo

按照我们实验室的经验，Co60照射与你的实验目的有很大的相关性，看你是做半致死还是致死，而且更重要的是剂量没有定论，一般来说体重和周龄对于照射剂量非常重要，我们的经验是20g左右，8周龄选用8.5Gy比较好。最后的成功标志以嵌合率在85%以上为成功。
# |; O) U/ z* z5 q1 I# E另外小鼠的性别对实验的影响不大。

hyde

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" S/ j9 c; g4 i/ z! V1 `. a( ~6 @# Y# g& d2 P9 [8 A/ z
嵌合率如何判断？取细胞做流式分析？

goblinwang

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5 w# p& G- [8 M$ Z+ i" b+ H8 `9 D3 f) k( o- c
按理论看，每10X5个BMcell就含有一个HSC，而一个HSC就足够重建整个造血系统了，性别最好一致，不过获得的细胞含量，没差异，受体鼠，最好用公鼠，至于嵌合率，那你是用CD45.1和CD45.2老鼠进行BMT，这样也只能流式了
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hyde

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# d$ ?& |0 S7 H% x% S, L/ g: P1 C- `6 S% ]( K
1，关于抗生素，国内外环境不一样，国内一般用的比较重的药物是吧，有什么推荐的？有文献说ph水太酸小鼠会不太喝。  需要每天换饲料换水吗？1 v% z- Y. D/ p7 d8 r; [; Y+ f1 g
2，有的文献说分离骨髓细胞的缓冲液不能加FBS，有些又可以，（最后重悬的不能有血清可以理解）-------我的理解是开始分离的时候可以有，后面快注射前的几步清洗就要去掉，防止对小鼠的影响？

goblinwang

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- f3 V, m" u+ C$ x# z- c6 j  u/ \6 g, L+ y
抗生素，你看参考文献就行。这应该没什么问题，我的水不是酸处理的，不用每天换。FBS的使用，我的理解和你一样，