小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正

hyde

刚开始以为这个区是技术讨论区，后来感觉像文献交流区哈…
  r! C& o" H6 ~( m  V! I, E" B准备练习一下小鼠骨髓移植， 整理了一下protocol ，不知道可行性如何 ？ protocol 整理.zip (5.63 MB)

2014-6-23 21:47 上传

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hyde

求实战者指导改正
; g3 D; p9 q, u$ T

goblinwang

一只老鼠可以得到10X7的细胞，受体只需要2-10X10X5就行了，C57小黑鼠做尾静脉，难度大，手法需要练习，注射器最好不要用1ML的，针头太细，冲骨髓的时候，容易产生机械损伤，致死剂量照射，未处理的话，一周开始死亡，我是一次性照射10Gy,照射的时候最好密封无菌处理

hyde

回复 goblinwang 的帖子+ G! o( t3 y2 ?, C! W) U8 H( i

3 Y: A" C/ @2 K0 b: p4 r9 S如果分离的细胞不进行流式分选出干细胞也只需要这么少细胞吗?

hyde

回复 goblinwang 的帖子' d3 v; L* z( J( ?# z4 f5 c

' o1 l1 U3 S6 O) ~9 q+ n/ g小鼠的性别有关系吗+ F+ X* B. k( v( R

sysuhoo

按照我们实验室的经验，Co60照射与你的实验目的有很大的相关性，看你是做半致死还是致死，而且更重要的是剂量没有定论，一般来说体重和周龄对于照射剂量非常重要，我们的经验是20g左右，8周龄选用8.5Gy比较好。最后的成功标志以嵌合率在85%以上为成功。$ [" H. a! m; W, G' v3 r5 R7 Y
另外小鼠的性别对实验的影响不大。

hyde

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+ L2 d" w" u/ N6 S# y: q. ^: [
嵌合率如何判断？取细胞做流式分析？

goblinwang

回复 hyde 的帖子9 l3 r  j6 Y$ N

, I# y  i; T9 D0 W6 ^5 D按理论看，每10X5个BMcell就含有一个HSC，而一个HSC就足够重建整个造血系统了，性别最好一致，不过获得的细胞含量，没差异，受体鼠，最好用公鼠，至于嵌合率，那你是用CD45.1和CD45.2老鼠进行BMT，这样也只能流式了  d5 U- @9 t# E" ^! ?7 M! i3 E

hyde

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9 K0 a7 Z" P# h. x2 G8 d: \# y8 C" }3 l
1，关于抗生素，国内外环境不一样，国内一般用的比较重的药物是吧，有什么推荐的？有文献说ph水太酸小鼠会不太喝。  需要每天换饲料换水吗？: J  v3 p5 H( j
2，有的文献说分离骨髓细胞的缓冲液不能加FBS，有些又可以，（最后重悬的不能有血清可以理解）-------我的理解是开始分离的时候可以有，后面快注射前的几步清洗就要去掉，防止对小鼠的影响？

goblinwang

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2 o& z% h# y9 e: g5 ^; ^( L) u7 F2 k" q2 ^3 e: R0 K& {* G
抗生素，你看参考文献就行。这应该没什么问题，我的水不是酸处理的，不用每天换。FBS的使用，我的理解和你一样，