关于CFU，成集落培养的问题

子非鱼

脐带间充质干细胞的集落应该是用液体培养基吧。成品的甲基纤维素培养基的分装的话，考虑种植时的损耗就分1ml一管，不考虑就可以分900ul一管。

子非鱼

你现在是不是有一瓶甲基纤维素的培养基的体系啊？B cell的集落培养体系好像也是甲基纤维素的培养基，但是当时因为一些原因，我没有认真看产品的资料，所以也不确定。但是我们用的甲基纤维素的培养体系中有长出过间充质干细胞，但是不是聚集状的，所以间充质干细胞的集落应该是不行的。
( e/ y. J5 r0 B! E; v你说的二倍培养，三倍培养是集落培养中的吗？我没有听过，只知道原代集落的二次铺板。
: k% l9 O! P% d7 k我是个渣渣，所以很多了解的都不全面。

子非鱼

我主要也是做的造血干细胞的集落。
5 M0 T2 p1 D6 Z( ]我贴一下我在书上看到的集落重铺的内容，因为书上是讲自己配集落体系的情况，所以你斟酌着看吧。
" M" F. l  [( w  j: z' a  w集落重铺
" N4 S8 u0 x4 o. r4 }8 y  ?" x    注意：该技术只适用于使用甲基纤维素培养的原代细胞。琼脂培养基过于坚硬，极其难将其中的集落挑出进行二次铺板培养。若要将CFU-GM的原代集落进行二次铺板培养，只需将琼脂替换为甲基纤维素，并将2×McCoys替换为IMDM。8 L9 ?+ k8 m- I# E
材料/试剂5 m0 r9 J# r4 \7 ^' h2 n
除非特别说明，所有材料均需灭菌
' H2 ~5 U1 M9 K9 K5 r(1)        带通风设备的超净台
. `" U& A! [# V1 @' s- `(2)        倒置显微镜
  H, b9 _1 b! b6 A- B3 B( z' V(3)        20ul微量移液器+ \! ?' Q0 f( l$ Q( s6 W& a8 {3 ~
(4)        含青霉素/链霉素的IMDM
" ]! P; x( L2 H(5)        12mm×75mm聚丙烯试管
, t" E' ~7 _' k- H6 Q收集集落步骤+ C2 r  j% z4 D) b5 B. C  {
所有步骤均需无菌操作。
) V, i3 V" Y+ `/ P7 h! r9 V(1)        确定需要进行二次培养的集落数目。每个集落准备一只试管，加入100ul含有2%FBS的IMDM，拧紧盖子。
2 m# }7 q8 G- y' t( g% p(2)        将显微镜放置在有通风设备的超净台中。- X; z: d% R; E4 \6 c! l" `
(3)        将含有待收集集落的平板置于显微镜的载物台上，固定平皿并移去平皿盖。" ]7 J6 k. f4 [
(4)        如果显微镜没有配置平皿固定装置，可将胶带的黏面向外环成一个圆圈，将两个这样的圆圈粘在载物台上，将平皿置于其上，同样能达到固定的目的。
! N. D% _' L. K, w(5)        找到目的集落后，用20ul移液器轻轻吸出集落。
0 x* d; u( R/ e; X/ I(6)        单独存在的集落最容易收集。& Q, V9 X0 J/ K7 \$ m( q
(7)        将集落转移到（准备好的）含100ulIMDM培养基的试管中，吹吸数次以清洗吸头。2 q9 o) t- S/ R
(8)        集落收集完毕后，进行铺板操作。( d! `4 X, d6 y; O% z8 P" _
集落收集后的铺板步骤) u% J8 ~" ^. S4 i7 V! J) o
所有步骤均需无菌操作
" \2 w, k9 h, T5 @7 g(1)        计算收集到的集落数，按每个集落1.1ml的量准备培养基混合液（包括甲基纤维素），静置使气泡溢出。8 W& s& u/ V6 p
例如，如果你从含有IL-3、Epo和SCF等生长因子的平皿中收集了100个集落，那么就准备110ml培养液，所用生长因子与原始平皿中的相同，并在加入细胞之前加入甲基纤维素。
' t4 j8 B' c! M  E(2)        当培养液澄清后，用配用16口径（gauge）针头的3～10ml注射器，向每个已含有收集到的集落的试管中加入1ml，振荡混匀。
, ^9 H2 b4 m5 ]% }2 T6 ^% I(3)        静置。
3 J" J) B& C! s1 O(4)        将上述混合液倒入新的35mm平皿中，转动使液体覆盖平皿。$ e  l! h, h* u: ]
甲基纤维素比较黏稠，总会有培养液残留在试管中，因此不能100%重铺所有集落中的细胞。如果你的实验需要定量计算最后的结果，可以加入一定比例的培养基混合液，通过矫正计算进行统计。例如，加入1.1ml（1ml培养基+0.1ml收集的集落）培养基混合液中的0.9ml，所得的二代集落数则大致代表了全部集落中82%的集落生成细胞。( P( j; b* V* e( V6 m3 R4 e
(5)将平皿放在37℃、5%CO2/O2的湿润环境中培养14d.( N1 o) C. A/ v" y$ M4 U