如何提高慢病毒载体中目的基因在细胞中的表达强度？

Yorkshining

如题，想提高目的基因在单个细胞中的表达强度（不是指阳性率，而是指阳性细胞中该目的基因的平均表达水平），慢病毒载体中有抗性基因，有哪些策略可以实现此目的呢？

goodboy

MOI提高一下试试

490096812

更换启动子，等增强基因表达的元件UCOE等

gondobar

更换更合适的启动子，变更外部刺激环境！

zhouleiwang2

根据本人的经验，不揣冒昧提几点建议：
* w% u. j# t; O0 q- g5 A1.如上面几楼所说，可以通过更换更强的启动子或者与细胞背景特异性的的高表达启动子以及添加与转录增强相关的元件、使用更有效的转录终止信号等手段以达到增强目的基因转录水平、提高mRNA水平的目的。, S9 Z) W- i& n/ O3 o
2.改善mRNA的结构，比如添加Kozak序列提高翻译的起始效率。4 ]  Q9 H8 c  i! G0 U- |
3.优化mRNA碱基组成，一方面尽量使用目的细胞最常用的密码子，另一方面要尽量提高ｍＲＮＡ的稳定性，排除ｍｉＲＮＡ的结合位点等，另外，也可以添加有助于mRNA稳定的某些mRNA结合蛋白的结合元件。
  Q/ j  J, F% F0 t6 x2 x* N% i4.如果目的蛋白对细胞有毒性的话，最好使用诱导系统，待转染细胞扩增到合适的数量之后，再加入诱导剂诱导目的基因的大量表达。3 z! P; M, S; d% N% S/ O. c* e
5.具体到慢病毒载体，目前用的比较多的一种策略是载体目的基因下游添加WPRE元件，该元件据说可以提高目的基因的表达。