2i培养mESC遇到问题

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用2i培养的话，mES的克隆致密化程度会更高，更加立体化，所以看起来显得比较“小”，只要是铺板密度稀一点，培养时间长一点，就可以长大！用2i培养对feeder Cells的杀伤力是比较大的，所以克隆贴壁（feeder）就比较差，悬浮的变多

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7 }# Y; e+ ]$ k$ G0 }" ]' M* C8 w离心上清-消化-中和-离心-铺板；加血请也可以，好多文章都是配合KOSR，因为mES用2i培养体系就是避免血清培养的；2i培养也是一样，看细胞量的多少来换液传代；没加b-Me影响不会很大，因为一般的去氧化剂过段时间后也会失去作用，不过最好是加；1-硫代甘油没用过，不知效果如何

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. A# V" `5 b  x1 X& I/ y& H  a+ c
$ M; ~, P, `1 t3 a问题出在你的培养基上，我一直在用经典的2i培养基培养，成分如下+ Q1 F  f8 ^- g1 x& P
2i Media
6 x+ r" I" D, ~9 c0 I& rFor 1L, N2B27 Medium (Ying Q, Nature Biotechnology 2003)
& `$ y) H9 z& m% q( i/ M$ v8 g
* H% L; z0 T3 s. s* u( N' g" l1.        500 ml of DMEM/F12 supplemented with modified N2 (Invitrogen)2 k& [+ N  n# a: r$ T* y  q
2.        500 ml of Neurobasal medium supplemented with B27 (Invitrogen).5 U' }8 I' j2 h
3.        Pen-Strep (final 50 units-50ug)        5 ml
" y7 o8 ^4 p! a: b3 @7 E8 `4.        bME (final, 0.1mM)                        100 ul (1M stock)1 ]( V+ D5 V: Q& s& I# q1 ?
5.        Lif (final, 1000 units/ml)                8 ml  (1.25x 105 units/ml stock)3 N) Z6 w2 T2 ]
6.        PD0325901  (final 1 uM)                0.5 ml (2000x stock)6 z. M0 T0 o, {
7.        CHIR99021 (final 3 uM)                0.5 ml (2000x stock)
9 \/ g  w, N  R7 h! R2 g8.        Amphotericin B  (optional) 1：100 标准计量看说明书
# ?0 I; K4 d- O! Y/ i1 h& E

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2 c  n+ A& J3 z实践出真知啊