求助培养人脐带间充值干细胞所需因子的含量是多少

qiaozhong.9876

最近养人脐带间充质干细胞效果总是不理想，我用的是国产的DMEM|F-12和国产的Hyclone的血清，没有加因子，不知道问题出在哪里，养不起来，我查了一些文献需要加EGF和bFGF,我刚买了这俩种因子但是我不知道怎么稀释，求前辈指点

cloud100

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) p8 F4 g. a6 |6 H! o5 W3 t2 B
9 h5 v& O/ T4 E% K  `+ ?呵呵，我也一样，不过我也还没成功呢。不过我可以和你交流一下我加营养因子的方法。EGF;bFGF都是PEPROTECH的。用DMEM/F12溶解，分装到小管-20°保存就OK了，最终添加到培养基的浓度在5-10ng/ml应该都可以。说明书说加点BSA牛血清白蛋白分装更好，不过我嫌麻烦，没加。7 _1 E, }* S# h8 A0 I' V% @
我的：EGF100ug用10mlD/F溶解，分装到100个0.1mlEP管里，每次1个小管加到100ml培基里，终浓度为10ng/ml；；；BFGF10ug，20mlD/F溶解，分装到20个1mlEP管里，每次1ml加到100ml培基里，最终浓度为5ng/ml.

cloud100

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* D6 Z  @0 i8 ^2 j
6 o2 m3 C4 r% w' K$ K网上有很多相关资料的，我也是看的资料也问了人这么做，你可以再多查查。

baby00000003

可有图片？; q  s7 P, G3 ~6 m+ e4 j$ L9 S
一般来说DF-12+10%FBS
( Z' ~1 D7 s3 S+ w5 }" R! o10ng/ml FGF-b
/ `$ s3 z0 v) p# E7 B/ e3 S4 t10ng/ml PDGF-bb
7 I/ C. F) N; b- k( q100ng/ml EGF* D, g6 |5 ~+ F: t+ O5 _
就好

qiaozhong.9876

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  L5 V% _2 v) N/ D' j' N; A3 z0 ^! J6 H* C1 g
非常感谢

qiaozhong.9876

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! `' s3 c  `6 f/ Y+ f/ j' K0 w4 G1 j3 x  \% W
一看细胞状态不好我就没照，把细胞仍了

qiaozhong.9876

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( _& v* V" m4 z% ]2 _* i  U  {7 W2 J6 q/ `$ x2 J
必须用PDGF-bb吗？

qiaozhong.9876

回复 qiaozhong.9876 的帖子! n7 j( ~) A: O+ ?1 `! A

+ g$ e9 _# M7 X1 ?9 R- y8 v我看有的文献也加Glutamax 和DEX，这个有必要吗？

baby00000003

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5 o2 a; Q0 d2 g4 e, m
! y/ ^" m0 _1 V9 _. v嗯.....要不来mesenpro试试？如果不计成本的话....

萝卜干4892

我用的是组织贴壁法：DMEM/F12含10%FBS，没加因子。细胞生长状态各方面都不错咯。