求助培养人脐带间充值干细胞所需因子的含量是多少

qiaozhong.9876

最近养人脐带间充质干细胞效果总是不理想，我用的是国产的DMEM|F-12和国产的Hyclone的血清，没有加因子，不知道问题出在哪里，养不起来，我查了一些文献需要加EGF和bFGF,我刚买了这俩种因子但是我不知道怎么稀释，求前辈指点

cloud100

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8 g) l8 N7 s0 D- S' D呵呵，我也一样，不过我也还没成功呢。不过我可以和你交流一下我加营养因子的方法。EGF;bFGF都是PEPROTECH的。用DMEM/F12溶解，分装到小管-20°保存就OK了，最终添加到培养基的浓度在5-10ng/ml应该都可以。说明书说加点BSA牛血清白蛋白分装更好，不过我嫌麻烦，没加。3 N8 |. B, [( `' g" ^( X. X) C; o5 g8 R
我的：EGF100ug用10mlD/F溶解，分装到100个0.1mlEP管里，每次1个小管加到100ml培基里，终浓度为10ng/ml；；；BFGF10ug，20mlD/F溶解，分装到20个1mlEP管里，每次1ml加到100ml培基里，最终浓度为5ng/ml.

cloud100

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网上有很多相关资料的，我也是看的资料也问了人这么做，你可以再多查查。

baby00000003

可有图片？$ B8 A/ _; {$ |0 L  r
一般来说DF-12+10%FBS; h/ K/ m' _/ m
10ng/ml FGF-b
, E& U$ {- r* z. F; O# |/ n10ng/ml PDGF-bb) \7 r% y, D. d8 h0 P& }4 }0 P
100ng/ml EGF4 u4 L3 p7 T/ |0 a7 Y- g
就好

qiaozhong.9876

回复 cloud100 的帖子8 J. A. ]4 c% m' k6 ?+ C( @
4 b& h0 l+ y3 ?- U( R* l
非常感谢

qiaozhong.9876

回复 baby00000003 的帖子: ^( }4 Z0 q$ V% u
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一看细胞状态不好我就没照，把细胞仍了

qiaozhong.9876

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4 ]6 X: o  D2 V5 B& u# c4 z$ n必须用PDGF-bb吗？

qiaozhong.9876

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我看有的文献也加Glutamax 和DEX，这个有必要吗？

baby00000003

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$ m- K  j7 C' K( b7 k$ X) Z  W% O- s0 C5 B, F
嗯.....要不来mesenpro试试？如果不计成本的话....

萝卜干4892

我用的是组织贴壁法：DMEM/F12含10%FBS，没加因子。细胞生长状态各方面都不错咯。