求助培养人脐带间充值干细胞所需因子的含量是多少

qiaozhong.9876

最近养人脐带间充质干细胞效果总是不理想，我用的是国产的DMEM|F-12和国产的Hyclone的血清，没有加因子，不知道问题出在哪里，养不起来，我查了一些文献需要加EGF和bFGF,我刚买了这俩种因子但是我不知道怎么稀释，求前辈指点

cloud100

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2 V5 \/ t% C7 ?2 @3 Y
! B: H( B9 r- H, v# [9 P' R! _呵呵，我也一样，不过我也还没成功呢。不过我可以和你交流一下我加营养因子的方法。EGF;bFGF都是PEPROTECH的。用DMEM/F12溶解，分装到小管-20°保存就OK了，最终添加到培养基的浓度在5-10ng/ml应该都可以。说明书说加点BSA牛血清白蛋白分装更好，不过我嫌麻烦，没加。
$ Q# ~) w7 D6 v- \我的：EGF100ug用10mlD/F溶解，分装到100个0.1mlEP管里，每次1个小管加到100ml培基里，终浓度为10ng/ml；；；BFGF10ug，20mlD/F溶解，分装到20个1mlEP管里，每次1ml加到100ml培基里，最终浓度为5ng/ml.

cloud100

回复 cloud100 的帖子2 r/ I6 d4 s. Y6 m% ]+ W& O1 R  O
; S7 r( Q2 |: |1 j3 d, ~. F2 {5 r
网上有很多相关资料的，我也是看的资料也问了人这么做，你可以再多查查。

baby00000003

可有图片？
  N9 h1 X9 T! Z) [* E: J# x一般来说DF-12+10%FBS. X8 s( W; ?4 e9 Z. G# ]7 L
10ng/ml FGF-b9 x' h3 U/ @" U9 L& `
10ng/ml PDGF-bb8 Q2 g0 t4 ]6 S& L. ^  g1 w; c- ~) @
100ng/ml EGF! X( f& A/ m* a
就好

qiaozhong.9876

回复 cloud100 的帖子3 `/ a) r! O2 F  A2 n# c1 R

) S. F2 C/ l! M0 V9 @; W非常感谢

qiaozhong.9876

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7 m2 y8 |/ Q9 _: |- y% x) [! F% p; h- f) j8 b
一看细胞状态不好我就没照，把细胞仍了

qiaozhong.9876

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6 v. M/ h( Z8 {/ j+ N. E
6 a+ b3 N3 o- B# T* u必须用PDGF-bb吗？

qiaozhong.9876

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* M, A' m- K% x
6 Y& F) B# d9 b. X4 v  c& s! _我看有的文献也加Glutamax 和DEX，这个有必要吗？

baby00000003

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3 F6 k3 O2 r  J) L& n& J3 [嗯.....要不来mesenpro试试？如果不计成本的话....

萝卜干4892

我用的是组织贴壁法：DMEM/F12含10%FBS，没加因子。细胞生长状态各方面都不错咯。