小鼠脾脏细胞？

hyde

看到油分离小鼠脾脏细胞的，用注射器中间的塞子将脾脏在200目筛网上研磨，请问这样拿到的细胞主要是不是淋巴细胞呢？那是不是还需要红细胞裂解液以及淋巴细胞分离液来纯化获得的细胞？

qingxingruyu

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脾脏细胞悬液的制备：( A; {# X0 K* y( R
1、        胀眼摘除眼球取血（以备收集外周血淋巴细胞），然后再颈椎脱臼处死；
$ ~4 Z- {4 k. f; p; n+ }, R2、        用75%酒精消毒；; ~3 {+ A% ^, ]; [4 \6 `
3、        超净台内无菌条件下用灭菌镊子取出脾脏，剔除周围的结缔组织，放入含1640培养基的无菌平皿中，放4℃冰箱暂存；4 s6 |. c' E( {: o' Z0 E
4、        剪碎，用2块毛玻璃片或注射器活塞尽量研磨产生单细胞，转入细胞滤器中，加入含1000U双抗（P/S）的1640基础培养液，用2.5ml注射器活塞轻轻研磨挤压，混悬，过滤，再加入1640基础培养液（含双抗）冲洗滤网上剩余的组织细胞，将悬液吸入15ml洁净的离心管中；. |9 j  w- o/ H# t
5、        4℃，～2000rpm离心5min，弃上清；+ B( D" {, f. l# Z  k' k: n
6、        加入2ml红细胞裂解液（1×），涡旋振荡重悬细胞，静置1min，以去除红细胞，再加入约5ml1640基础培养液终止反应，4℃，～2000rpm离心10min；! M3 }6 I0 C# h7 t# s( t" D2 a
7、        重复上述洗涤步骤2次，以除去红细胞裂解液（如果红细胞裂解效果不理想，即还能观察到较多的红细胞存在，可重复裂解。）；
" u) J4 s' A/ F2 j" L4 j/ G8、        将上述细胞置于培养瓶中，于37℃培养2h，除去贴壁细胞，收集未贴壁的细胞悬液即获得脾淋巴细胞；
& J' X! |7 b) B4 G  I( h& {9、        计数，调整细胞浓度进行余下实验。/ D, z8 u8 }: ]2 d% G; P; j

hyde

谢谢
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