如何提高FACS分选细胞的存活率

pujixing

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' V1 y2 }) l  D6 T" E9 O想请教大家一个问题，如何提高流式分选出来的细胞的存活率？我们分选的是用GFP标记的胚胎干细胞。分选前后都加了ROCK inhibitor。( R! K1 H7 B0 k& }8 {& D, V* x
先谢过了。

pujixing

回复 goast8 的帖子  R. ]9 \4 R2 T: u! w* P, U& S2 s, H
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Thanks!

goast8

我觉得关键是分选前细胞的处理，分选中无菌防护，及分选后的快速转移到合适的培养环境中。4 X' V1 g* `$ K# M6 ~# b
我曾做过多轮基于GFP的293细胞的分选，效果都还是不错的。

pujixing

多谢以上各位回复。我的实验中涉及到GFP阳性细胞的分选，因此无法用基于抗体的磁珠。分选时用高浓度血清，加入rock inhibitor。我看资料显示降低筛选速率（sorting rate，由电压等参数控制）可帮助存活。我一般用的event是8000-10000/sec，资料建议的是3000左右。因此决定尝试一下。但速度降低后，同样的样本需要的时间可能会加倍甚至更长。

amanda1988

磁珠分选效率会低一点，活性高。FACS分选的话加双抗，注意无菌，分选的液体里面加血清润管子。

shaozi402

回复 pujixing 的帖子1 f4 J9 i, T6 d  L0 h7 h, ]
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流式分选后细胞存活率较低，没有什么好的办法，磁珠是个不错的选择，但准确率可能会差一些

qingxingruyu

流式分选活细胞,难度太大,首先:无菌操作就是个大难题.然后就是抗体内的防腐剂.建议分选活细胞还是用磁珠的好~~