western blot用牛奶奶粉封闭时，必须用牛来源的二抗么？ - 干细胞研究新手区干细胞之家



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me望梦成圆

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楼主

发表于 2014-10-28 16:45 |只看该作者 |正序浏览 |打印

本帖最后由细胞海洋于 2014-10-29 08:11 编辑
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用牛奶奶粉封闭时，必须用牛来源的二抗么？用其他二抗是不是会与封闭液中的蛋白结合呀？

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121qwq

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14楼

发表于 2015-10-22 10:30 |只看该作者

不一定，10%BSA页可以

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xiaoxiaodeji

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13楼

发表于 2015-9-10 00:29 |只看该作者

你要弄清楚你的一抗是什么来源的，在选择相应的二抗，这跟你用什么做封闭液没有太大的关系，但是封闭液封闭后，敷二抗之前，最好还是充分洗涤除掉多余的封闭液比较好。

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fation

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12楼

发表于 2015-8-21 04:28 |只看该作者

完全没有关系。二抗是针对你使用的一抗，必须和一抗一致。牛奶只是封闭的作用，和抗体没有啥关系。

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冰百叶

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11楼

发表于 2015-8-19 17:43 |只看该作者

不一定要用牛来源的二抗，只要二抗不与奶粉反应就可以。个人觉得若是用牛来源的二抗效果可能会更好。

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luoan

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10楼

发表于 2015-8-3 16:03 |只看该作者

先搞清楚封闭液的作用，就不会提出这样的问题了：膜与蛋白的结合是疏水相互作用，刚转膜完时目的蛋白与膜相互结合，但膜上还有很多区域未结合蛋白，因此如果不封闭，一抗也是蛋白也会与膜疏水结合，高背景。封闭液是BSA或脱脂奶粉配成的，其蛋白成分会与未结合蛋白的膜结合，及封闭未膜上未结合蛋白的区域，这样就防止了一抗的非特异性结合。封闭液跟二抗根本没啥关系。