BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。5 [$ m+ q2 I8 q6 F9 j1 [# x; B8 H
1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。
: i9 @( N6 g- z1 i% R2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。% l+ E; z! I" X. E
3，是否需要添加prolygrene?怎么加？! r1 ]9 B1 F9 p: _* Y4 q
4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？
( ]/ H& t8 g# E, |; C谢谢！

luyue6453

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& f' l, q: p, U$ _- U9 s/ w7 b! B0 L8 X- `/ x9 a% O) p3 c% l1 w- P9 v
你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43
2 n) {7 W$ L. g( j8 x  l各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。7 E& I/ H' F9 {5 \+ A. @* l) S; n
1，我查了文献 ...

/ A  ]' Q& C( I谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

三木一叶

回复 liukuantj 的帖子6 k( c; u  r% S4 Q' B! ?- H. O

4 f$ v' L7 V) m+ O. J) O直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？0 A; X% f9 l$ Z5 k& B1 C
4 R6 J) B! ]2 u! A
我最近在做干细胞的转染，好难转啊