BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
* L; k! F- M4 ]' r# l1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。" A: y% k$ ?: |- Y, p# G
2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。9 U* x# `  W5 s9 h* d
3，是否需要添加prolygrene?怎么加？
" b% L( J4 H( b! Q! s4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？
- q# a: U, H2 v5 G( E. ~2 x0 T谢谢！

luyue6453

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* ~5 G0 a5 V: R& Q- D7 \- O. @2 y6 {- j
- g" w$ X* f/ Q2 Z/ K" p你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43 , X! m0 c2 e  F3 @7 E% H
各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
4 z% }: N# t. c1，我查了文献 ...

+ `* x8 `; |: L. l
谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

三木一叶

回复 liukuantj 的帖子7 C1 i+ j1 ?! K9 P: z
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直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？
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$ \. j9 F' a: w& W6 z我最近在做干细胞的转染，好难转啊